| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
HPLC ´´tailing´´ >>>
|
 |
| Автор | Тема: HPLC ´´tailing´´ | |||||
|
alia Пользователь Ранг: 7 |
 15.03.2005 // 13:39:17
подскажите как можно избавиться от tailing на HPLC и от чего это вобще зависит спасибо |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
15.03.2005 // 14:01:34
tailing - это асимметрия хроматографического пика. Она зависит от многих факторов: анализируемого вещества, содержания остаточных силанолов на поверхности сорбентов, состава подвижной фазы, температуры и тд. Вопрос нужно ставить более конкретно. А вообще можно почитать Шатца, там об этом писалось. Да и у Рудакова в книгах этот вопрос обсуждался. |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
15.03.2005 // 14:21:46
На столь общий вопрос можно ответить только общим правилом: надо обеспечить в колонке единственный механизм сорбции и отсутствие зависимости коэффициента распределения между подвижной и неподвижной фазами от концентрации. Как это сделать в каждом конкретном случае - это уже отдельный вопрос, требующий информации о веществе, колонке, подвижной фазе, температуре, количестве закалываемой пробы (объем, концентрация), составе растворителя пробы. |
|||||
|
alia Пользователь Ранг: 7 |
15.03.2005 // 15:40:02
я работаю с Salbutamol sulfate и вобще достаточно недавно с HPLC колонка LiChroCart 125-4 с LiChroSorb RP 18 (5µm) мобильная фаза Methanol,0,2 mM Natriumdihydrogenphosphat dihydrate ,Aqua bidest,Natrium heptansulfonate,pH=3 температура 20 c v(inject)=100 µl книги это хорошо но где их взъять то может в и- нете есть что почитать по этому вопросу |
|||||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
15.03.2005 // 17:09:01
Есть методика, описанная в фармакопеях, так там используют колонку С8 и фазу "Mobile phase: mix 22 volumes of acetonitrile and 78 volumes of a solution containing 2.87 g/l of sodium heptanesulphonate and 2.5 g/l of potassium dihydrogen phosphate adjusted to pH 3.65 with dilute phosphoric acid. В вашем случае можно увеличить содержание органики и попытаться поварьировать рН подвижной фазы. Должно получиться. А книги есть на этом форуме. Поищите в разделе литература. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
15.03.2005 // 18:04:38
Девушка, а что такой язык-то странный? Вы из России или нет? Колонка у Вас - обычная обращенка. Подвижная (а не мобильная) фаза, проще говоря элюент, довольно странный. В нем присутствует ион-парный реагент гептансульфонат. Его применяют для увеличения удерживания и разделения азотистых оснований. рН 3 - нормальный рН для такого рода анализов. Удивление вызывает лишь такая огромная концентрация неорганической соли (кислого фосфата натрия), как 0.2М! Ни к чему хорошему это не приводит (и меня не убедить в обратном никакими доводами). В работе вообще и в ион-парном режиме в частности я стараюсь избегать (и избегаю) таких концнтраций солей. А лучше ее выкинуть совсем, или оставить в сотню раз меньше. Но это все лирика. Важно то, что в 125х4 колонку вы вбухиваете аж 100 мкл пробы - это многовато, право. Если чувствительность позволяет, лучше уменьшить это количество на порядок. Далее, не указано в чем собственно (в каком растворителе) идет инжекция. Ион-парные режимы бывают чрезвычайно щепитильны в этом вопросе. Пробу лучше вводить в люенте, или хотя бы разбавлять пробу вдвое элюентом перед вколом. Вобщем, я бы соль выкинул, метанола уменьшил, объем пробы уменьшил, пробу разбавил перед вводом элюентом. А откуда Вы знаете (кстати), что у Вас этот самый "тейлинг"? |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
15.03.2005 // 18:24:01
Так все-таки, 0.2mM или 0.2M? В первом случае соли может оказаться маловато. Я бы использовал от 5 до 15 mM. Насчет объема закола Константин совершенно прав, да и концентрацию вещества в пробе знать не мешает, не говоря уж о растворителе. Книги есть в библиотеках. |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
15.03.2005 // 22:53:06
|
|||||
|
alia Пользователь Ранг: 7 |
16.03.2005 // 12:09:06
в методе стоит 0,2 mM он не фармокопейный мне его колега дал ,он по нему свою докторскую защитил.Injection идет в Methanol:Wather 1:1 0,5ml а с языком действительно проблема вы уж извините |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
16.03.2005 // 13:49:57
Понимаем  сами не без греха (по поводу языка то бишь).Пардон, я как 0.2 увидел, сразу решил, что М, посколько в mM - это слишком мало, и никто таких концентраций не применяет, поскольку буферная емкость маловата. Аля, эту соль вообще можно убрать, думаю, поскольку кислый раствор ион-парного реагента сам обладает достаточной буферной емкостью. Единственно, при приготовлении буфера для элюента лучше пользоваться хорошим рН-метром, а при приготовлении элюента - хорошей мензуркой, отмерять аккуратно, все по-отдельности. Будет порядок. Если уж приспичило добавить соли, то можно 20mM. Сколько в граммах сказать? Трудности у Вас из-за очень плохих условий инжекции, в которых допущены элементарные хроматографические ошибки (но для медика - простительно). Во-первых, вместо воды надо применять элюент (разводя его впополаме с метанолом, как сказано). Во-вторых, вместо 100 мкл теперь я вижу объем 500 мкл. Откуда он взялся? В таких условиях надо вводить не более 20 мкл пробы, это предел!!! Можете прислать хроматограммы до и после рекомендаций? |
|||||
|
alia Пользователь Ранг: 7 |
16.03.2005 // 14:28:24
спасибо Kонстантин обязательно попробую с вашими рекомендациями куда хроматограмы послать? |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
