| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Гель-фильтрация - понять результат >>>
|
 |
| Автор | Тема: Гель-фильтрация - понять результат | |||||
|
indigoriya Пользователь Ранг: 2 |
 01.04.2005 // 15:15:48
Уважаемые коллеги, хотелось бы узнать ваше мнение. Для выделения белка массой 20 кДа использовала гель-фильтрацию на S-100. Сам по себе белок образует крайне стабильные мультимерные агрегаты. Гель-фильтрация ведется в учловиях, когда белок переходит преимущественно в мономерную и димерные формы. Но при этом, он выходит в первом пике. Хотя в смеси наносимой на колонку присутсвуют белки гораздо более высокой молекулярной массы. Не могу найти объяснения, почему белок выходит первым. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
16.02.2006 // 16:11:36
Ну, какие у кого соображения будут? |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
17.02.2006 // 9:43:51
Очертите так сказать, все что Вы делаете, а то из общих фраз сложно сделать вразумительные выводы. Какой белок ? , из чего выделяете ?, что такое S-100 (Сефадекс, Сефакрил ...)?, условия хроматографирования, ПФ. |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
17.02.2006 // 12:41:22
Идея в том, что она пытается делить белок, имеющий субъединицы в 20 кДа, осложняется у нее это дело тем, что субъединицы легко образуют четвертичную структуру, где их может быть объединено до 24 штук и более. Она пытается анализировать все это дело в условиях, когда с/единицы способны существовать по 1-2 в отдельности, т.е. практически в условиях глубокой денатурации (я тоже не понял- как она их денатурирует- как для электрофореза SDS-PAGE или в совершенно дурных концентрациях детергентов?). Сефакрил- это не слишком жесткий гель для водной гель-хроматографии с рабочим диапазоном 1-100 кДа (это самый мелкопористый из них). Это значит, что уже при объединении 5 (а не то, что 24) с/е все вывалится в предел эксклюзии. Мож, она нам пояснит еще чего? Если белок денатурировал в SDS, то и одной с/ед хватит, чтоб уйти в "исключение". |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
20.02.2006 // 21:09:48
Ну, гуры местные...У кого все же есть соображения? Тема злободневная... |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
20.02.2006 // 22:49:46
Редактировано 1 раз(а) Злободневная, грите? А что ж в аналитический журнал не заходите? Вопрос-то только в природе аналита (ну, и чуть-чуть в размерах). |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
21.02.2006 // 4:55:30
Вот, в этом "чуть- чуть" все и заключается, вероятно? По идее, для гель-фильтрации природа аналита должна быть безразлична. Или это будет уже не гель-хроматография. |
|||||
|
Фантом из той же оперы Пользователь Ранг: 6 |
23.02.2006 // 2:47:33
Ну значит не переходит. Давайте на стол условия. Чего у Вас там? Мочевина? Гуанидин? Какая концентрация оных гадостей? Какой рН? Рекомендую 0.5 М уксусятины и 8 М мочевины. У меня в таких условиях бета-агрегаты валились (просто в мочевине при том же рН - не валились). |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
