Форумы ANCHEM.RU: LC/MS, С18 - нестабильный поток элюента, скачет давление

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

LC/MS, С18 - нестабильный поток элюента, скачет давление >>>

Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: LC/MS, С18 - нестабильный поток элюента, скачет давление

iad
Пользователь
Ранг: 3

23.06.2010 // 15:50:50

Пришлось осваивать LC/MS. Каждый день прибор меня радует новыми сбоями. Вроде поставили свежую С18. Вот сегодня поток на колонке нестабильный, давление скачет как заяц, простейший альбумин с колонки не смывается. Предколонку поменяла, ацетонитрилом промыла. Не помогает. Что бы сделать?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Волгин
VIP Member
Ранг: 1327

24.06.2010 // 0:10:47

"Простейший альбумин" в ацетонитриле (ACN) не растворяется. Промойте 0.1%TFA (трифторуксусной кислоты) в 40-60%ACN (градиентом). И на будущее. Бывает, что белок смывается в очень узком диапазоне состава - буквально в 2% и ни раньше, ни позже не выходит. И еще. Надеюсь, сорбент вашей "С18" - широкопористый, если конечно Вы предполагаете работать с белками. Иначе могут быть и другие сложности.
А по поводу давления - проверяйте клапаны и герметичность на входе в насос(ы). И работу дегазатора

iad
Пользователь
Ранг: 3

25.06.2010 // 10:52:10

Спасибо! Конечно, я не целый белок туда заколола, а гидролизат.
Дегазатор шуршит, purge несколько раз сделала, вроде нигде не подтекает... А поток все равно нестабильный и давление, соответственно, скачет. На что еще обратить внимание?

Drone
Пользователь
Ранг: 124

25.06.2010 // 11:01:29

Возможно, воздушный пузырь в системе.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

26.06.2010 // 5:17:35

iad пишет:
Пришлось осваивать LC/MS.

А стоило ли? (Мы раньше радовались, когда появлялось новое оборудование). С таким-то настроением оно работать у вас не будет.
Поскольку вы ничего из предыстории нам не поведали, можно только сделать вывод, что система плохо промыта, а двухголовый насос ВД страдает неработающим клапаном. Поскольку нелетучий буфер в МС не применяют (не должны, по кр. мере), то это воздух или предыдущая соль (хотя, хз). Если это не броски от переключения клапана потока (MS-Waste).
Мониторь давление (на регулярность бросков), марку девайса- в студию. Нефиг на таком даже пытаться что-то инжектить. Народ тут любезный, тебе помогут.

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

26.06.2010 // 21:40:16

Коллеги все правильно советуют.

Только добавлю: УФ детектор есть? LC куда легче с УФ траблшутить, чем с МС - там свои проблемы даже при работающей LC. Тот же BSA digest вполне покатит как тест, ну или цитохром.

Если давление стабильно и все визуально ОК, поставьте на ночь короткие (30 мин) градиенты добавив 1% ацетона в В, без ввода пробы. Нужно точно быть уверенным что градиент у вас такой как надо и стабилен. Дальше будете закалывать пробу (в этот момент проверяете автосамплер, колонку и т.д.), и если все хорошо - (и только если все хорошо!) - дальше на масс спек. На первое время держите УФ детектор в линии, пускай что то потеряете в эффективности, но будете видеть стабильность и градиент (по базовой линии).

И, если все хорошо, детектор долой и начинаете реальную работу.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Анализатор жидкости ФЛЮОРАТ-02-3М
Упрощенная модель фильтрового флуориметра, предназначенная для выполнения рутинных измерений объектов, для которых предварительно установлены спектральные характеристики фотолюминесценции.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Волгин
VIP Member
Ранг: 1327

28.06.2010 // 2:42:20

iad пишет:
...вроде нигде не подтекает... А поток все равно нестабильный и давление, соответственно, скачет. На что еще обратить внимание?

Сообщите плз марку Вашего дивайса или хотя бы как организован градиент: на стороне низкого давления или высокого, сколько компонентный. От этого начнем плясать.

iad
Пользователь
Ранг: 3

28.06.2010 // 11:02:36

Спасибо за внимательное отношение!
Я сейчас пытаюсь наладить контакт с ловушкой Agilent 1100. Она у нас похожа на Франкенштейна и собрана из запчастей от трех своих сестер.
Проблема в нестабильности потока (скачет от 0 до 10 мкл/мин, хотя максимум должен быть 4 мкл/мин) и давление резко скачет по синусоиде с разбросом 30 +/- 10. Гоняем исключительно пептиды. Градиент линейный вода (5%ACN) -ацетонитрил (5% воды), все с муравьиной кислотой. Стандартные тесты сделать не могу - нет заглушки для изократического наноса, стрельнуть пока не у кого. Может, у нее датчик потока накрылся?

albert
Пользователь
Ранг: 440

28.06.2010 // 13:52:27

iad пишет:
...проблема в нестабильности потока (скачет от 0 до 10 мкл/мин, хотя максимум должен быть 4 мкл/мин) и давление резко скачет по синусоиде с разбросом 30 +/- 10...

А каким именно насосом Вы пытаетесь качать 4мкл/мин?

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

29.06.2010 // 5:07:06

Пипец...


Ответов в этой теме: 9	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты