Форумы ANCHEM.RU: HILIC: где найти в Питере и оправдан ли выбор?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

HILIC: где найти в Питере и оправдан ли выбор? >>>

  Ответов в этой теме: 13
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: HILIC: где найти в Питере и оправдан ли выбор?

Entomo
Пользователь
Ранг: 9

14.03.2011 // 19:13:54

Уважаемые биохимики,

Вопрос таков:
Пытаюсь выделить регуляторную молекулу из биологического материала методом ВЭЖХ.
При предварительном пропускании образца через SepPak молекула элюируется 0,05% уксусной кислотой. Таким образом, гидрофильна.
При последующей ВЭЖХ (уксусная кислота/ацетонитрил, градиент 1%/мин) все содержимое выскакивает на 2-ой минуте и разделения не наблюдается.
Заменить противоион на ТФУ с целью удержать содержимое на колонке не выйдет, так как впоследствии лиофилизат фракций добавляю в культуру клеток, которые от ТФУ дохнут (а на уксусную к-ту реагируют нормально).

В качестве доп.характеристик: молекула термостабильна; молеклярная масса, согласно фильтрам, меньше 3 кДа; природа неизвестна - ее присутствие в образце определяю лишь по реакции клеток, которым оный добавляю.
Оправдано ли применение в этом случае HILIC? Если так, то где его можно сделать в Питере (в крайнем случае, в Москве)?

Буду благодарен за советы и помощь.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

14.03.2011 // 20:47:18

Редактировано 2 раз(а)

Задача творческая.
Рекомендую найти хорошего универсального спеца, поставить четко ему задачу, а дальше дело техники и времени. К сожалению, в Питере никого подсказать не могу.

Вариантов тьма, особенно учитывая тот факт, что, по сути, строго ничего неизвестно, а следовательно в ходе "работы" может выяснится много "интересных" моментов (например то, что соединение, на самом деле - соединениЯ и др. "сюрпризы").

Если в Питере никого не найдете, можете обратиться ко мне (Москва) - я или сам помогу (есть опыт и все необходимое, но может не быть времени), или дам вектор.

Entomo
Пользователь
Ранг: 9

14.03.2011 // 23:22:12

Большое спасибо.
У нас тут обратная ситуация: специалисты есть, колонки нужной нет) Поэтому советов идти в обход уйма: мол, смывать ТФУ, а потом ее смолами убирать из фракции.. Но решил поискать более простой и быстрый способ разделения.
А с широкопрофильными спецами, что верно, то верно, везде напряг.
К "сюрпризам" готов. Но нет их пока)
Все ж таки подожду ответа из Питера. Вдруг кто поближе объявится.

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

15.03.2011 // 0:34:57

Редактировано 3 раз(а)

Неверно понял.
Найдите для начала простой "силикагель", желательно современный и "чистый" (металлы), и желательно с порами 120-300А, хотя, для начала и 60А пойдет, но скорее всего получится... "не очень". А дальше дело техники (хотите HILIC, хотите PALC). Думаю, в Питере найти ВЭЖХ колонку, например, 250*4,6мм с простым силикагелем, как два пальца...

Есть же еще куча вариантов. Если кроме Sil C18 ничего нет - модифицируйте поверхность (динамически). Подумайте об ИПХ (т.е. вместо ТФУ, что-то другое и более гидрофобное, + попробовать с "другой стороны" - ТЭА и т.д.). Можно еще HIC "подключить".
Кстати, проверьте (на С18) зависимость удерживания вашего сорбата от % МеСN (например), т.е. с увеличением % в каком-то диапазоне, может увеличиваться удерживание. Проверьте влияние рН.

Только не до конца понимаю затею: Вы хотите выделить аналит, а затем прямо эту фракцию в клетки добавлять и смотреть "биологический ответ"?

Entomo
Пользователь
Ранг: 9

16.03.2011 // 21:30:12

Редактировано 1 раз(а)

Еще раз спасибо.

Переговорил с нашими хроматографистами. Оказывается, та ОФ ВЭЖХ, которую делаем, идет с ионной парой. Насчет HILIC поддержали, но не уверены, что я найду в России полупрепаратив гидрофильной хроматографии. Аналитическая колонка не подходит по причине большого количества сухого материала (1 грамм!). По этой причине поищу еще несколько грубых методов для дальнейшей пробоподготовки с целью по максимуму концентрировать искомое и уменьшить вес. Все усложняется тем, что поскольку молекула регуляторная, ее в образце содержится мизер и большого количества имеющегося вещества хватит лишь на десяток биологических тестов.

Фракции сушу, затем растворяю в MQ и добавляю в культуру клеток. Реакцию оцениваю по уровню биологического ответа. В дальнейшем предполагаю синтезировать найденное химическим путем.

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

16.03.2011 // 22:24:09

Редактировано 1 раз(а)

Пользователь удалил свое сообщение

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Макролаб, ООО
«Macrolab» – компания, специализирующаяся на всестороннем оснащении научных и учебных организаций, лабораторий промышленных предприятий и служб экологического мониторинга. Компания «Macrolab» является официальным представителем оборудования торговых марок «Ulab» и «Эксперт» на территории РФ.

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

16.03.2011 // 22:24:58

Сначала надо аналитическую HILIC сделать, а затем на полупрепаратив переходить, а то, может, там c HILIC то же "крутить и крутить" (не понятно в какую сторону).
В идеале, конечно, нужно полупрепаративную колонку с тем же сорбентом иметь или подбирать посредством тестов аналогичную.

На этом этапе упирается все скорее в подбор всех условий и решение хром. задачи, остальное - дело второстепенное (полупрепаративная ВЭЖХ система и т.д.)

Полупрепаративную HILIC найдете, если хорошо поищете

В остальном понятно - "пахать и пахать"

З.Ы.: Да, от балласта надо срочно избавляться - не хорошо это "иголку в стоге сена" таскать...

Волгин
VIP Member
Ранг: 1327

16.03.2011 // 22:52:08

Один мой старый знакомый убил 2 года на выделение "озверина". В конце объект оказался ионом цинка.

Смотрите, не попадитесь на такую же удочку. Может сначала начать с эксклюзионной хроматографии?

Entomo
Пользователь
Ранг: 9

16.03.2011 // 23:41:12

Редактировано 1 раз(а)

Мысли о гель-фильтрации возникали тоже (благо дело, имеется), но, опять же, вещества слишком много пока.

В качестве пробоподготовки склоняюсь к мысли о чем-то древнем типа осаждения ненужностей сульфатом аммония: вычитал, что гидрофильные вещества так поделить можно. Однако процентный диапазон добавляемой соли для осаждения гидрофильных соединений пока не нашел - видимо, опытным путем придется..

ПС. А как в итоге Ваш знакомый цинк-то обнаружил?
Сам я на всякий случай опроверг "литературную" версию о влиянии на мои клетки перекиси и оксида азота

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

17.03.2011 // 1:15:59

Редактировано 1 раз(а)

2 года - это еще немного

Главное, что задачу "добил" до конца! Относительно много таких историй было и будет...

Обсуждаемая задача - с горизонтом от 1 года. (ИМХО)

Хорошо (относительно время- и трудозатрат) еще, если попадется что-то (одно или несколько) уже известное и изученое.

Насчет "высаливания": в данной ситуации - это "слепая кулинария", с весьма вероятным отрицательным результатом. (ИМХО) Но Вы попробуйте...

Комбинаторика, конечно, хорошо, но...

Олег
Пользователь
Ранг: 529

17.03.2011 // 16:09:00

Entomo пишет:
Мысли о гель-фильтрации возникали тоже (благо дело, имеется), но, опять же, вещества слишком много пока.

Гель-хроматографию можно проводить на колонках большего размера, раз 10 - 15 поделите (это дней 10-15), и разделите... А не хотите попробовать колоночную малого давления хроматографию с силикагелем, модифицированным SiMe₃?
Если не секрет в какой организации работаете и на каких объектах проводите испытания?


Ответов в этой теме: 13 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты