| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Посоветуйте "быструю колонку" для HPLC >>>
|
 |
| Автор | Тема: Посоветуйте "быструю колонку" для HPLC | ||
|
C_h_r_o_m_o Пользователь Ранг: 25 |
 28.09.2012 // 14:42:18
Добрый день всем! По роду моей деятельности мне необходимо анализировать чистоту одного гидрофильного пептида. Сейчас анализ удовлетворительного качества занимает 20 минут. Колонка стандартная 4.6*25 см. Изократический режим. Вопрос. Можно ли только используя более высокотехнологичные колонки сократить время анализа в 2-3 раза? При этом не выходя из области HPLC по давлениям? Если можно, что это за колонки? Я мельком встречался с колонками длиной около 7 см и зернением 3мкм (если не ошибаюсь). Вроде это были колонки фирмы Merck Но это было давно. Так же я слышал что-то о колонках Grace Rocket? но тоже без подробностей. Хотелось бы услышать мнение людей работавших с подобными колонками. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
varban VIP Member Ранг: 8699 |
28.09.2012 // 15:50:04
А объем после колонки у Вас какой? Если большой, то пики маленькой колонки размоет, как чернила в реке  -------------- Ой, что щас будет  Набигут милихромофилы и милихромофобы и устроят очередной холивар 
|
||
|
C_h_r_o_m_o Пользователь Ранг: 25 |
28.09.2012 // 15:52:59
Объём после колонки - 5 см капилляра. А потом кювета детектора. |
||
|
varban VIP Member Ранг: 8699 |
28.09.2012 // 16:05:52
А сколько в кювете? Если ведерная (5...10 микролитра), забудьте о таких размерах Впрочем, вот холивар: А вот и маленькие колонки: |
||
|
Kalambet Пользователь Ранг: 484 |
28.09.2012 // 16:17:56
есть еще POPLC а также монолитные колонки... |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
28.09.2012 // 16:26:40
Редактировано 2 раз(а) Банально: 1. Уменьшить длинну колонки в 2-3раза, соотв. при этом, может быть, надо будет использовать сорбент с меньшим диаметром частиц, т.е. 3-4мкм вместо 5мкм. 2. Использовать монолитные сорбенты (Onyx, Chromolith). С использованием этих колонок можно уменьшить время анализа в 5-10раз (относительно Вашей системы). В принципе, варианты 1 и 2 не требуют серьезной модификации современной аналитической ВЭЖХ системы (скорость сбора данных, экстраколоночный объем, насосы и т.д.). |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
C_h_r_o_m_o Пользователь Ранг: 25 |
28.09.2012 // 16:40:32
Редактировано 1 раз(а) Я пытался работать с колонкой 2*50мм и зернением 2мкм. Ничего путного не вышло. Уменьшение длины компенсируется уменьшением скорости из-за возросшего давления. Монолитные сорбенты, как я понимают при схожей эффективности имеют гораздо меньшее сопротивление и соответственно, дают возможность увеличить скорость потока? |
||
|
C_h_r_o_m_o Пользователь Ранг: 25 |
28.09.2012 // 16:55:52
Я посмотрел колонки Chromolith. Похоже это и есть те скоростные колонки которые мне встречались. Кто нибудь работал на них? |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
28.09.2012 // 21:10:02
Я пытался работать с колонкой 2*50мм и зернением 2мкм. Ничего путного не вышло. Вы читать умеете? В Вашем случае: 150-85мм * 4,6мм и 5 или, если не будет хватать эффективности, 3-4мкм. А вот на 50*2мм и 2мкм, без оптимизации экстраколоночных объемов (ячейка детектора, капилляры, инжектор и т.д.) Вашей ВЭЖХ системы, работать бессмысленно. Если будете пробовать монолит - Chromolith HR, у простых Chromolith (= Onyx) эффективность ниже. |
||
|
cholesterol Пользователь Ранг: 109 |
29.09.2012 // 11:54:49
Около 1 года назад озаботились проблемой сокращения времени анализа до 3-5 минут c 20-30 мин. Купили несколько колонок Kinetex C18 3*50mm 2.6мкм (поверхностно-пористый сорбент), Chromolith HR C18 4.6*50 (монолитная колонка второго поколения), Grace Platinum Rocket 7*50 1,5мкм (полностью пористый сорбент), Grace VisionHT С18P 7*33 1,5мкм (полностью пористый сорбент, но дешевле Platinum). Аналиты различные пептиды, содержащие 2-9 аминокислотных остатков. Буфер 50 мМ KH2PO4 - ACN в различных соотношениях (от 2 до 35% ACN), T=45 градусов. Прибор стандартный Shimadzu LC 20 Prominence c 12 мкл ячейкой детектора и капилярами на 0,005-0,007". Наихудшие результаты по эффективности разделения показала колонка Chromolith HR C18 4.6*50, но давление в системе самое низкое. Даже если использовать колонку в 2 раза длиннее она не даст такой же эффективности и скорости анализа, как лучшая из 4 протестированных колонок. Самая дешевая колонка. На предпоследнем месте по совокупности плюсов и минусов Grace VisionHT С18P 7*33 1,5мкм. Давление при F=2.75 мл/мин и около 20МПа, время анализа с градиентом 8-12 минут, изократика - 4-5 минут (в зависимости от пептидов в смеси). Очень достойный результат за свои деньги. Kinetex C18 3*50mm 2.6мкм. Совсем недавно пришла, работаем на ней менее 2 недель. К сожалению, нет ячейки на 2,5 мкл, поэтому колонка может быть не раскрыла весь потенциал, но это самая быстрая колонка из всех (и самая дорогая). Время анализа 1,5-3 мин на изократике, 5-7 мин градиент (в зависимости от пептидов в смеси). Но по эффективности разделения уступает Grace Platinum Rocket 7*50 1,5мкм. Объем вкола пришлось уменьшить с 5-10 мкл до 0,5-1 мкл. Наилучшую эффективность, но и наибольшее время анализа (5,5-7 мин на изократике, 10-13 мин градиент (в зависимости от пептидов в смеси)) показала Grace Platinum Rocket 7*50 1,5мкм. Это хорошая замена традиционных 4,6*150(250) мм колонок. У других производителей не встречал такой геометрии колонок, но для относительно старых систем это будет лучший выбор для сокращения времени анализа. |
||
|
C_h_r_o_m_o Пользователь Ранг: 25 |
03.10.2012 // 13:15:25
Спасибо огромное за пространный ответ. Попытаюсь разобраться и вникнуть. Если куплю и попробую - отпишусь! Спасибо ещё раз. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
