| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Интерфероны: определение сопутствующих белков методом ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Интерфероны: определение сопутствующих белков методом ВЭЖХ | |||||
|
vetal1987 Пользователь Ранг: 20 |
 25.12.2012 // 19:09:23
Добрый день! Подскажите пожалуйста, кто работал с интерферонами! Имеется методика определения сопутствующих белков методом ВЭЖХ по монографии ЕР 7,0 Interferon alfa 2 concentrated solution. У меня колонка Symmetry300C18, 4.6×250 mm, 5µm, скорость потока 1,0 мл/мин, длина волны 210 нм. Испытуемый раствор: 1 мг/мл белка. Пик выходит в районе 38 минуты. Проблема возникает с раствором сравнения. Приготовление: К объему испытуемого раствора (непонятно к какому объему???) добавляют такое количество 0,25 % Н2О2, чтобы его концентрация была 0,005% и оставляют на 1 час. Затем добавляют 12,5 мг L-метионина на каждый миллилитр раствора и опять оставляют на 1 час. По идеи должен образоваться некий продукт окисления интерферона. И затем измеряют коэффициент разделения между этим продуктом и интерфероном. НО ПРОБЛЕМА В ТОМ, ЧТО ПИКОВ НЕТ ВООБЩЕ! Кто может подсказать причину этого, буду очень признателен. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
26.12.2012 // 11:53:07
В принципе там все получается. Проверьте, не просроченная ли у вас перекись. Увеличьте ее концентрацию и время инкубации. Окисленный интерферон выходит небольшим двойным пиком на 0.9 по отношению к основному пику. |
|||||
|
Annie Пользователь Ранг: 29 |
14.01.2013 // 17:39:52
на какой колонке делали?? |
|||||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
14.01.2013 // 18:54:56
ZORBAX 300SB-C18 4.6х250 5 микрон |
|||||
|
Novice Пользователь Ранг: 71 |
16.01.2013 // 10:37:45
У меня в приведенной в фармакопее системе вообще ничего не выходит. Колонка как у Вас, один в один, новая. Выходит маленький пичек в самом начале и все. Причем что стандарт колю, что исследуемый образец. Прям не знаю что думать. |
|||||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
16.01.2013 // 12:25:51
Редактировано 1 раз(а) Сколько образца вы наносите? Еще проблема может быть в подготовке образца. Как вы его фильтруете? Нужны специальные фильтры, не сорбирующие белок - PVDF. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
16.01.2013 // 16:10:19
Чисто из интереса, а как соотношение пиков окисленной / восстановленной форм говорит о сопутсвующих белках? Нет, я понимаю это официальный метод, но все же в чем идея? Тем более, что только в белках перекисью не окисляется. Навскидку: Met (1ox, 2ox); Trp (2ox); Cys (в -SS- и цистеиновую к-ту); -SS- хотя там надо по-жестче; если хлорид ионы есть, перекись всякую радикальщину иниициирует (типа, хлорирование тирозина в кольцо), да в общем мало-ли |
|||||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
16.01.2013 // 16:52:01
Метод взят из ЕР. Там название метода related proteins. Фактически это видоизмененные формы интерферона. Окисляется там действительно метионин, если верить литературе))) Сопутствующие белки проверяют на электрофорезе. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
