| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
определение ингибиторов трипсина >>>
|
 |
| Автор | Тема: определение ингибиторов трипсина | |||||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
 16.04.2013 // 15:09:00
Кто-нибудь может дать ссылки на методики, или хотя бы названия документов по определению ингибиторов трипсина? Что-то не могу ничего найти
|
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
 16.04.2013 // 17:10:27
Работая когда-то в отделе молекулярной биологии я занимался выделением ингибитора трипсина из кукурузы, а потом определением его ингибирующей активности.Методики можно найти разве что в сборнике по биохимии издательства МГУ, год издания посмотрю только дома (на работе нет). В основу положена методика определения протеолитической активности трипсина. Т.е. необходим раствор субстрата (казеин по Гаммерстену на фосфатном буфере рН=8,0 или другой субстрат, содержащий пептидные связи, гидролизуемые трипсином), стандартный раствор трипсина в 0,001 М солянке, чтобы не происходил автолиз, термостат водяной на температуру 36 С, Эппендорф с насадками 10 мл, секундомер, 5 % раствор ТХУ, 0,05 М фосфатный буфер рН=8,0 и спектрофотометр (254 и 280 нм). Далее все тривиально, в ряд пробирок разливают субстрат, фосфатный буфер. Одну превращают в контроль реактивов и поэтому вместо ингибитора и раствора трипсина добавляют дист.воду, в другую вместо адекватного количества раствора ингибитора трипсина добавляют дист.воду, а раствор трипсина обязательно, но только после инкубирования пробирок с субстратом и разлитым ингибитором трипсина. Раствор трипсина добавляют по секундомеру с интервалом в 15 сек в прогретые пробирки, засекают 15 минут, затем в таком же порядке добавляют по 3 мл 5 % ТХУ для остановки реакции. Реакционные пробирки охлаждают, содержимое фильтруют и оптическую плотность фильтрата измеряют на спектрофотометре при 254 и 280 нм. (зависит от типа субстрата). Естественно, активность ингибирования определяют по кинетике процесса гидролиза. Если просто количество ингибитора, то нужно калибровку строить по стандартному раствору ингибитора трипсина из сои. Она имеет обратный характер |
|||||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
17.04.2013 // 7:21:49
Вы поконкретней спрашивайте. И лучше на molbiol.ru - там есть специалисты по ферментам. Что значит "определение ингибиторов трипсина"? Выделение и очистка природных, типа соевого ингибитора трипсина? Или определение константы ингибирования? Трипсин - сериновая протеаза, соответственно ингибируется такими фторорганическими ингибиторами как PMSF, DFP, AEBSF (которые действуют на все сериновые протеазы) и более специфическими (апротинин, соевый ингибитор и ему подобные белки). |
|||||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
 17.04.2013 // 8:39:52
Дело в том, что с 1.06.2013г вступает регламент таможенного союза ТР ТС 021/2011. А там для соевых, диетических и продуктов детского питания заложены нормы. А по каким методикам определять? Стандартные есть? Или опять правая рука не знает, что делает левая? Ясно, что с точки зрения ферментологии там не Бог весть что такое, но это ж импровизация. |
|||||
|
r.bor Пользователь Ранг: 20 |
11.09.2013 // 15:17:04
если данная тематика еще интересна, то есть такой ISO 14902:2001 - как раз для определение ингибиторов трипсина в соевых продуктах |
|||||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
11.09.2013 // 21:27:39
Спасибо Вам большое. Хоть что-то. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
r.bor Пользователь Ранг: 20 |
12.09.2013 // 11:08:32
если будут проблемы с поиском данного ИСО, то у меня есть скан этого документа. от Вас требуется адрес почтового ящика |
|||||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
12.09.2013 // 16:20:43
Нашёл на англицком языке. Если у Вас на русском, пожалуйста kump{coбaчkа}list.ru |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
