| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Металлы и ДНК >>>
|
 |
| Автор | Тема: Металлы и ДНК | ||
|
randle Пользователь Ранг: 5 |
 13.11.2003 // 20:00:15
Вот у меня есть днк-олигонуклеотиды длиной 11 и 22 нуклеотидных звена в количестве 100pmol и растворимые соли двух/трехвалентных металлов (от магния до предположим свинца или даже празеодима, лантана)..в количестве 10 nmol, объем смеси предполагается 10 мкл. и вот задумал я избавиться от этих ионов металлов, как? Диализ, гель-фильтрация, электрофорез, ионообменник, обращенка - ? кто что посоветует.. тему обсуждали на molbiol.ru/cgi-bin/ubb/ultimatebb.cgi?ubb=get_topic;f=1;t=004075 и molbiol.ru/cgi-bin/ubb/ultimatebb.cgi?ubb=get_topic;f=1;t=004064 Буду благодарен за советы.. Алексей. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
13.11.2003 // 23:19:45
Наверное, тут дело даже не в концентрации, а в объеме. Обычно объем довольно большой, и поэтому стандартная процедура - диализ... поправьте если чего не понимаю.. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
14.11.2003 // 8:33:20
Я бы попробовал ТФЭ металлов на комплексообразующем сорбенте, например, "Диапак ИДК". Нуклеотиды должны проскочить, а металлы сядут практически количественно, правда, только d-элементы. Чтобы убрать кальций и магний, нужно использовать "Диапак Сульфо" в слабощелочной среде. А вот как себя поведут в этих условиях фрагменты ДНК - одному богу известно. Короче, надо пробовать. Есть еще один вариант обессоливания, т.е. уберутся как катионы, так и анионы - эксклюзионная хроматография на полужестких гелях, например, на Сефадексе G10 или его более современных аналогах. В свое время мне этим методом удавалось неплохо освободиться от ионов солей в растворах пептидов с ММ 3000 - 18000 Дальтон. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
14.11.2003 // 8:57:11
Редактировано 1 раз(а) Да, чуть не забыл! Диализ на стандартных мембранах пробовать не стоит - слишко маленький объем, да и неклеотиды сядут напополам. После этого их ничем не смыть. Правда, одно время в оборонке производили тефлоновые мембраны, бомбардированные ядрами ксенона. Вот через такую мембрану при диализе и металлы уйдут и целевое вещество не сядет. А где их достать сейчас - понятия не имею.  Так что единственные приемлемый вариант - эксклюзионка. При этом, правда, объем раствора, содержащий ДНК, увеличится в несколько раз. Но лишний растворитель можно убрать, например, в лиофильной сушилке или, если время терпит, - в банальном эксикаторе. |
||
|
Костя Пользователь Ранг: 576 |
14.11.2003 // 11:18:58
гель форез с переносом олигов в диализный мешок |
||
|
randle Пользователь Ранг: 5 |
14.11.2003 // 14:22:46
Я добавил в ПААГ гель соли до 100мМ и в стандартном трис-боратном буфере прогнал форез.. фронта не было, все разошлось - думаю это лучшее, т.к. потерь нет вообще.. ведь мне собственно избавляться от металлов нужно было для того. чтобы переосадить (здесь металлы дают проблемы с перерастворением) и разделить в геле А так вроде бы все получается и так.. Спасибо. Сейчас проблема в организации эксперимента (чтобы 10 мкл простояли 2-ое суток и никуда не "улетели").. но это уже не аналитика.. Спасибо. А эксклюзивную хроматографию попробую как-нибудь.. А. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
14.11.2003 // 17:34:18
согласен |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
14.11.2003 // 17:36:37
Сядут нуклеотиды на ИДК замечатено... хелатная ЖХ - вообще один из видов аффинной... Скорее, можно обессолить просто на картридже с обращенкой, это, к тому же, на порядок легче, чем гель форез |
||
|
randle Пользователь Ранг: 5 |
16.11.2003 // 16:11:24
Наверное, я не до конца объяснил.. мне от металлов нужно было избавиться, чтобы осаждать удобнее было перед форезом.. Итоговая цель - форез, высушивание геля ну и радиоавтография.. Спасибо за помощь, проблема решилась сама собою.. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
17.11.2003 // 9:49:32
Может быть и сядут, не пробовал, но пуриновые основания у меня в кислой среде на ИДК не садились, а это - соединения родственные нуклеотидам. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 9 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
