Форумы ANCHEM.RU: Депротеинизация в качестве пробоподготовки - смерть колонки? Метанол, перхлористая кислота, трихлоруксусная кислота

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Депротеинизация в качестве пробоподготовки - смерть колонки? Метанол, перхлористая кислота, трихлоруксусная кислота - что "вреднее". >>>

  Ответов в этой теме: 11
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Депротеинизация в качестве пробоподготовки - смерть колонки? Метанол, перхлористая кислота, трихлоруксусная кислота - что "вреднее".

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

22.04.2014 // 18:32:30

Уважаемые коллеги! Прошу помочь идеями для преодоления аналитической проблемы. Мы создали LC-MS метод для определения дипептида карнозина на растворах хроматографических стандартов. Но, к сожалению, застопорились на методе экстракции. В идеале нужно делать ТФЭ, но пока ждем соответствующие картриджи. Хотим, чтобы не простаивать, создать альтернативный метод - пробоподготовка депротеинизацией. Наиболее очевидный метод - депротеинизировать метанолом. Но здесь возникает проблема быстрого загрязнения колонки, поскольку фаза гидрофильная - 95% "воды". Есть опасения, что на такой фазе у нас на колонку сядут жиры и стерины и она выйдет из строя после десятка образцов. Я слышал, что можно осаждать белки ТХУ и перхлористой кислотой. Но говорят, что эти кислоты опасны для силикагеля. Подскажите способы, как мжно обойти эту "вилку". Подкинете статьи и рекомендации - буду очень благодарен.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

22.04.2014 // 19:11:53

Dionisii пишет:
Наиболее очевидный метод - депротеинизировать метанолом.
....
ТХУ и перхлористой кислотой. Но говорят, что эти кислоты опасны для силикагеля.

Интересно, как это вы собираетесь использовать ТФЭ без депротеинизации?

Ее не избежать по-любому. Зря вы паритесь. Все делают осаждение белков, многие трихлоруксусной. И ничерта с вашей колонкой не сделается от 10-20 мкл пробы. Метанол или ТСА - это от искомого соединения зависит.
ЗЫ: А че такое- перхлористая кислота? o_O

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

22.04.2014 // 19:34:46

Serga пишет:

Dionisii пишет:
Наиболее очевидный метод - депротеинизировать метанолом.
....
ТХУ и перхлористой кислотой. Но говорят, что эти кислоты опасны для силикагеля.
Интересно, как это вы собираетесь использовать ТФЭ без депротеинизации?
Ее не избежать по-любому. Зря вы паритесь. Все делают осаждение белков, многие трихлоруксусной. И ничерта с вашей колонкой не сделается от 10-20 мкл пробы. Метанол или ТСА - это от искомого соединения зависит.
ЗЫ: А че такое- перхлористая кислота? o_O

perchloric acid, правильно будет, наверное перхлорная кислота?

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

22.04.2014 // 19:37:07

Serga пишет:

Dionisii пишет:
Наиболее очевидный метод - депротеинизировать метанолом.
....
ТХУ и перхлористой кислотой. Но говорят, что эти кислоты опасны для силикагеля.
Интересно, как это вы собираетесь использовать ТФЭ без депротеинизации?
Ее не избежать по-любому. Зря вы паритесь. Все делают осаждение белков, многие трихлоруксусной. И ничерта с вашей колонкой не сделается от 10-20 мкл пробы. Метанол или ТСА - это от искомого соединения зависит.
ЗЫ: А че такое- перхлористая кислота? o_O

Вопрос - от 10% ТХУ силикагель не деградирует?

chemist-sib
Пользователь
Ранг: 557

23.04.2014 // 4:04:13

Dionisii пишет:
[Вопрос - от 10% ТХУ силикагель не деградирует?

Не должен

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

23.04.2014 // 5:49:58

Ничто не вечно. Когда-то оно "деградирует" и без денатурирующего агента.
Так что...

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Лаборатория аналитического контроля ЗАО "РРЭЦ"
Проведение количественного химического анализа проб грунтового воздуха с территории распространения техногенных газогенерирующих грунтов газохроматографическим способом

Клим Леонов
Пользователь
Ранг: 21

26.04.2014 // 9:43:14

Упаривайте метанол и растворяйте сухой остаток в подвижной фазе.

smihаilоv
Пользователь
Ранг: 3174

26.04.2014 // 11:31:39

Редактировано 1 раз(а)

Клим Леонов пишет:
Упаривайте метанол и растворяйте сухой остаток в подвижной фазе.

Опять нарвался не на свою тему. Метанол упарится, а 95% воды? Где Вы увидели "сухой остаток"? Если что не понимаю - сильно не ругайте.

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

26.04.2014 // 13:04:33

Редактировано 3 раз(а)

Клим все правильно пишет - это очевидное решение в этой ситуации. Супернатант (метанол) лучше упаривать в токе инертного газа (азот) без нагрева, но на крайняк подойдет и speedVac. Досуха упаривать не обязательно, можно просто упарить до необходимого объема (5-10мкл например). С метанолом могут быть проблемы с рекавери (качественно и количественно).

Насчет вышеперечисленных кислот (пробоподготовка) - скажем, относительно воды, они будут негативно влиять на сорбент (деградация), но в рамках обычной работы - ничего страшного и экстраординарного.

Добавлю, что юзал HClO4 в качестве компонента элюента при работе на Sil C18 (pH=1-12) и ничего, никто не пострадал (pH=1-2, 25-30oC). Концентрация, конечно, была относительно низкая. Правда неудобно было с ней работать, поэтому заменил на H3PO4.

Основной минус этих кислот - это коррозионная активность, т.е. понятно, что будет, если они будут регулярно попадать в ионный источник.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

26.04.2014 // 19:30:51

Редактировано 1 раз(а)

Dionisii пишет:
Мы создали LC-MS метод для определения дипептида карнозина на растворах хроматографических стандартов.

virtu, они вообще из воды его смотрят. Нафиг им метанол?

Щас ждут слабый катионообменник, надо понимать, и собираются обойтись без депротеинизации?
Непонятно, В ЧЕМ они собираются смотреть свой карнозин...

virtu - "упаривать до 5-10 мкл"- нафига? Это же жутко неудобно и дает неточные количественные результаты. (Ошибка в 1-2 мкл аукнется очень сильно). Упаривать досуха. Никуда этот карнозин не улетит.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

26.04.2014 // 19:30:51

Редактировано 1 раз(а)

Два одинаковых поста вылезло. Затер.


Ответов в этой теме: 11 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты