08.07.2014 // 18:24:49

---

elenaf пишет:
Обращаюсь к опытным химикам!
Есть вещество (фарм. субстанция) – L-α-Глицерофосфорилхолин (Холина гидроксида (R)-2,3-дигидроксипропилгидрофосфат; GPC).
Существует примесь – 1,2-Гидрокси-sn-глицерофосфат (GPC).
Предложена методика ТСХ для определения посторонних примесей:
- Сорбент - Kieselgel 60 F254 "Merck" с толщиной слоя 0,25 мм
- ПФ – метанол-вода (90:10)
- Высота пробега – 12 см
- Количество наносимого вещества: GPC – 40 мкг, 0,4 мкг, 0,2 мкг; GPА – 40 мкг, 0,4 мкг, 0,2 мкг
- Обнаружение – аммиачный раствор нитрата серебра, нагрев при 170гр. С 5-15 минут до появления коричневых пятен.
ПРОБЛЕМА – не детектируются пятна растворов свидетелей GPА, нанесенных в количестве 0,4 мкг и 0,2 мкг.
Кто-то может что-нибудь посоветовать?

---

08.07.2014 // 19:51:13

---

elenaf пишет:
L-α-Глицерофосфорилхолин (Холина гидроксида (R)-2,3-дигидроксипропилгидрофосфат; GPC).
Существует примесь – 1,2-Гидрокси-sn-глицерофосфат (GPC).
П... не детектируются пятна растворов свидетелей GPА,

---

09.07.2014 // 6:17:11

---

Garry пишет:

---

elenaf пишет:
Обращаюсь к опытным химикам!
Есть вещество (фарм. субстанция) – L-α-Глицерофосфорилхолин (Холина гидроксида (R)-2,3-дигидроксипропилгидрофосфат; GPC).
Существует примесь – 1,2-Гидрокси-sn-глицерофосфат (GPC).
Предложена методика ТСХ для определения посторонних примесей:
- Сорбент - Kieselgel 60 F254 "Merck" с толщиной слоя 0,25 мм
- ПФ – метанол-вода (90:10)
- Высота пробега – 12 см
- Количество наносимого вещества: GPC – 40 мкг, 0,4 мкг, 0,2 мкг; GPА – 40 мкг, 0,4 мкг, 0,2 мкг
- Обнаружение – аммиачный раствор нитрата серебра, нагрев при 170гр. С 5-15 минут до появления коричневых пятен.
ПРОБЛЕМА – не детектируются пятна растворов свидетелей GPА, нанесенных в количестве 0,4 мкг и 0,2 мкг.
Кто-то может что-нибудь посоветовать?

---

Первое, что приходит на ум - низкая чувствительность проявления.
Прежде чем менять наносимые объемы до предела обнаружения, так сказать попробуйте :
5 % раствор фосфорномолибденовой кислоты в этаноле, нагрев при 110 С 5 мин. На лимонно-желтом фоне темно-синие пятна.Чувствительность проявления (по лецитину) около 0,2 мкг в пятне.

Либо проявление в два этапа : 1. Опрыскивание бромфеноловым проявителем (0,05 г бромфенолового синего, растворить в 10 мл ацетона. 0,2 г нитрата серебра растворить в 60 мл воды. Два раствора смешать и довести до 100 мл водой.)
2. Опрыскать, обработанную проявителем 1, ТСХ 4 % лимонной кислотой.
Результат - сине-фиолетовые пятна на лимонно-желтом фоне. Я проявляю обычно методом смачивания (это касается фосфолипидов, как будет вести себя Ваша субстанция - не знаю)), а не опрыскивания и проявитель 2 - вода из-под крана. Тогда на бледно-голубом фоне фиолетовые-синие и красные пятна (зависит от хим.свойств).

Кстати, попробуйте 10% раствор ацетатата меди в 1 % растворе ортофосфорной кислоты. Опрыскать и погреть. На белом фоне должны быть серо-коричневые пятна. Ну и есть еще ферментное проявление. Но для этого необходим раствор фермента фосфолипазы А и раствор аскорбиновой кислоты и молибденовый проявитель (раствор, используемый при определении общего фосфора). Последний... если верить авторам - самый чувствительный.

---

09.07.2014 // 6:17:54

---

абр пишет:

---

elenaf пишет:
L-α-Глицерофосфорилхолин (Холина гидроксида (R)-2,3-дигидроксипропилгидрофосфат; GPC).
Существует примесь – 1,2-Гидрокси-sn-глицерофосфат (GPC).
П... не детектируются пятна растворов свидетелей GPА,

---

Извините за занудство, а какой из двух GPC является GPA?

---

  Ответов в этой теме: 4

Ответ на тему