| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
SDS-PAGE с набором от Beckman Coulter >>>
|
 |
| Автор | Тема: SDS-PAGE с набором от Beckman Coulter | |||||
|
Kaspiana Пользователь Ранг: 6 |
 23.02.2015 // 13:33:26
Добрый день! Стоит задача определения молекулярной массы белка методом КЭ. В наличии набор от Бекмана, куплен осенью, вскрыт на днях. Образец стандарта готовлю по методике - 10 мкл смеси стандарта, 85 мкл буфера для образцов, 2 мкл внутреннего стандарта и 5 мкл 2-меркаптоэтанола. Все смешивается и нагревается при 100С в течении 3 минут. На электрофореграмме характерный отрицательный пик выходит раньше, чем в примерах производителя, а затем большой горб (смесь стандартов???), а затем узкий пик (как будто бы вн.стандарта???).  Уж не знаю, на что думать. Буду благодарна за советы. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
metrim Пользователь Ранг: 646 |
23.02.2015 // 19:00:47
А вы уверены вообще, что можно вот так кит для полиакриламидного геля гонять на своей системе ?? |
|||||
|
Kaspiana Пользователь Ранг: 6 |
24.02.2015 // 9:03:21
Что конкретно имеете в виду? Можно ли на этом приборе с таким капилляром делать такой анализ? Можно, по всем характеристикам система соответствует приборам Бекмана. А смесь белков - это стандарты для калибровки, идут в наборе. |
|||||
|
metrim Пользователь Ранг: 646 |
24.02.2015 // 11:39:32
Ну буфер для нанесения в различных модификациях может включать Tris, DTT, SDS, глицин, глицерин, бромфеноловый синий. Вы вполне уверены, что все это - вам не мешает? |
|||||
|
Kaspiana Пользователь Ранг: 6 |
24.02.2015 // 12:08:14
Я не уточнила, речь идет о капиллярном электрофорезе. Буфер используется стандартный из набора. Насколько я понимаю, он создан таким, чтобы в нем ничего не мешало разделению хотя бы стандартной смеси (из того же набора). |
|||||
|
metrim Пользователь Ранг: 646 |
24.02.2015 // 12:39:31
То что означает КЭ - как бы даже и я понял  )буффер то из какого набора? для вашего КЭ или для денатурирующего гельэлектрофореза? |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Kaspiana Пользователь Ранг: 6 |
24.02.2015 // 15:25:15
Редактировано 1 раз(а) Для разделения использую полиакриламидный гель из набора (pH 8, содержит 0.2% SDS). Для образцов из набора беру соответствующий буфер, содержащий ДДСН (100 mM Tris-HCl pH 9.0, 1%SDS). До собственно образцов еще не добралась. Какой смысл, если пока что стандарты не выходят, как надо! |
|||||
|
metrim Пользователь Ранг: 646 |
25.02.2015 // 13:33:13
Редактировано 1 раз(а) Я капиллярным электрофорезом не занимался, потому совсем запутался. По денатурирующему гельэлектрофорезу подробно например тут разобрано Дайте ссылку на кит, которым пользуютесь, что бы понимать о чем вообще речь Мне например непонятно: почему вы детектируете на 220 и при такой гигантской щели, там ударно поглощает вообще что угодно, мне привычнее для белков использовать 280 |
|||||
|
ViktoriaVS Пользователь Ранг: 26 |
25.02.2015 // 14:00:52
Приведенная Вами электрофореграмма похожа на Эджилентовскую, у Вас эта система КЭ? Как вы заполняете неродные капилляры гелем? |
|||||
|
nenre Пользователь Ранг: 18 |
25.02.2015 // 17:35:19
Когда то давно прогонял этот кит, вот первый попавшийся рисунок стандарта. Делалось на бекмановском приборе. Вы саму методу полностью копировали или вносили какие то корректировки? |
|||||
|
Kaspiana Пользователь Ранг: 6 |
26.02.2015 // 17:15:44
Да, 7100. Почему Вы думаете, что капилляр неродной? Он есть в наборе. Только капилляр этот - обычный кварцевый. Заполняю под внешним давлением (2-4 бар), для этого есть баллон с газом (у меня гелий, но это просто так вышло). |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
