| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Сигнал DAD уходит в минус. В чём проблема? >>>
|
 |
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
 04.07.2015 // 6:33:28
Да пофиг, сколько там на "препаративной линии". Хоть 100 мл объем смесителя. Для вашей колонки больше 0,1-0,3 мл ну никак не айс. Если заменить смеситель на нормальный (с минимальным объемом), то можно. Колонки Ф4 мм могут нормально работать и при 0,5 мл/мин, только это удлиняет время анализа, а на результат практически не влияет. Полезно, если интерфейс ESI MS не выдерживает больших потоков, а ставить делитель потоков- влом. А вообще- че это за аппаратура такая? Может, она препаративная? (Вас не смущает мертвый объем в 10 мл на колонке 150*4 мм?) Граждане, RTFM. Я не могу дистанционно и вслепую решать такие траблы. Давайте уже включайте моск (некоторые думают, что я не знаю, как правильно пишется слово "мозг"  ) и приводите там в порядок все.
|
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
cholesterol Пользователь Ранг: 109 |
04.07.2015 // 9:25:53
Подозреваю, что это все связано с изменением показателя преломления при смене подвижной фазы в ячейке детектора, или с разным составом элюента и растворителя для образцов, или что-то вымывается с колонки в этой области, что поглощает меньше чем подвижная фаза, или еще много разных причин, кроме перечисленных выше. Проведите два анализа: 1) без закола и 2) заколите пустую пробу (только растворитель) и, скорее всего, узнаете в чем причина. Судя по приведенной хроматограмме, используемый метод не пригоден для анализа Ваших соединений. Либо неправильно перенесли методику на свое оборудование, либо в МГУ не умеют делать нормальные методики. Миксер на 4 мл для вашей системы достаточно большой, хорошо бы на 1,5 мл. Если плохо разбираетесь с градиентной хроматографией, то почитайте книги, благо они даже на русском языке выходят, |
||
|
metrim Пользователь Ранг: 646 |
04.07.2015 // 22:43:50
А не вызвано ли это тупо флуоресценцией подопытных пигментов? Какой именно детектор использовался в "МГУшной методике" ? |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
05.07.2015 // 15:39:11
За наводку на книгу огромное спасибо! Я пока изучаю Волгина, Схунмакерса и Садека. ВЭЖХ для меня новое явление в целом, в университете (десять лет тому назад) нам оборудование только на картинке показывали, а посему, вся теория, в отрыве от практики, оказалась мёртвой. Про миксеры я проконсультируюсь с поставщиком, вдруг у них есть меньшего объёма, но, как помнится, мне говорили, что Shimadzu ставят этот "классический миксер" на все аналитические системы... |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
05.07.2015 // 15:41:50
Признаться, чукча думал эту мысль одной из первых, но сразу отмел в виду вероятности близкой к нулю... Коллеги на биофаке МГУ тоже работают на ДАД. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
05.07.2015 // 15:56:57
Оборудование, заточеное под препаративное, но нас убеждали, что и с аналитикой справится вполне хорошо, так как насосы легко держат и потоки от 0,001 до 150 мл/мин и во всем диапазоне точность поддержания потоков и давлений укладывается с нормативы качества: насосы Shimadzu LC-20AP Prominence - 2 шт Дегазатор вакуумный DGU20-A5 - 2 шт Миксер для аналитического режима объемом 4 мл Инжектор Rheodyne 7725i c петлей 20 мкл и 1000 мкл Переключатель колонок ручной Детектор рефрактометрический RID-10A Детектор диодно-матричный SPD-20MA Коллектор фракций FRC-10A |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
05.07.2015 // 15:58:52
Я думаю, что мы не видим "влияния растворителя пробы" по той причине, что там уж совсем завернуто на 450 и 655 нм. Тут уже разницы никакой не заметишь. Видно только, что этилацетат поглощает даже чуть меньше, чем ацетонитрил. (Мертвый объем на колонке 150*4,6 мм проявляется на 2 мин максимум (при 1 мл/мин). Chamomillablue нам эту зону не показывает- хз, че там у него происходит (Его миксер градиента хоть и 4 мл, но стоит до крана ввода пробы, потому если будет влиять, то на форму и остроту градиента). Тем не менее, яма есть и она что-то означает. Тут другое забавно. По идее, этилацетат должен быть более сильным элюентом, чем ацетонитрил для ОФ ВЭЖХ на С18, а посмотрите на хроматограмму, когда MeCN начинает смывать с колонки какую-то дрянь после этилацетата, начиная с 29 минуты. Если на холостом градиенте челы Chamomillablue видят такую же яму (и такие же пики в районе 29-38 мин), то надо понимать, что провал после 11 минуты вызван посадкой грязи с этилацетата на С18, которая затем обратно снимается MeCN (колонка "регенерируется" от грязи )). Вообще- жесть. Я бы пробовал на нормальной фазе (ДИОЛ) и гексаном/i-PrOH, без градиента. По-любому надо оптимизировать анализ. Много времени и растворителя уходят зря. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
05.07.2015 // 16:09:05
Теперь понятно, откуда уши растут. Им лишь бы продать. На самом деле, с этой аппаратурой если и можно работать "в аналитической области", то только на грани фола, на колонках 8 мм и едва ли оно пригодно для колонок 4-4,6 мм, а для колонок 2-3 мм непригодно вообще. Чего бы они вам не пели там сладкими голосами.  Что толку, что ваш аппарат умеет подавать элюент со скоростью 1-30 мкл/мин, если работать на таких расходах- нельзя?И дело тут не в "точности и малых расходов", а в мертвых объемах, которые рассчитаны на препаративную работу, а не на аналитику. Диаметры труб вы тоже меняете? Вот то-то и оно. Скажу Вам даже больше. Не всякая обычная "аналитическая система" станет работать с колонками Ф1-2 мм (вместо стандартных 3-4 мм) по той же причине. Хотите убедиться сами? Попробуйте, спецэффекты будут незабываемыми. |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
05.07.2015 // 16:59:51
У нас был супердотошный сервисный инженер, который все это собирал и запускал, он тестировал на глюкозе и кофеине, бромкрезоловом синем именно на аналитической колонке 4,6 мм, был весьма доволен и формой пиков и т.д. Но на будущее учту, что аналитические колонки лучше покупать 10 мм. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
05.07.2015 // 18:20:43
Редактировано 1 раз(а) Нет, я не про то. Колонки 10 мм не бывают аналитическими. Надо покупать оборудование, которое соответствует задачам- для препаративных целей препаративное, для аналитических- аналитическое. Только и всего. Ну теперь уж работайте, на чем есть. ЗЫ. А вот интересно- вы реально нарабатываете препаративно что-то? (Раз покупали препаративник). |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 24
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
