Определение примесей в субстанции (ТСХ) >>>

Ответов в этой теме: 4

[ Ответ на тему ]

31.05.2016 // 12:50:00     

---

---

Виктория Ан пишет:
Доброго времени суток!
Уважаемые коллеги! Пытаемся воспроизвести методику определения примесей в Фенибуте, любезно предоставленную производителем. Метод ТСХ. Если "кратко":
Испытуемый р-р: 0,5 г фенибута в 10 мл этанола.
Р-р сравнения: 0,1 г СО фенибута в 10 мл этанола, потом разбавление (0,5 мл р-ра доводят до 50 мл этанолом)
Подвижная фаза: хлороформ - н-бутанол - раствор аммиака концентрированный (40: 60: 5).
Приготовление раствора о-толидина:
0,16 г о-толидина растворяют в 30,0 мл уксусной кислоты ледяной, добавляют 1,0 г калия йодида и доводят водой до объема 500,0 мл.
 Подготовка хроматографической камеры (1)
Стенки хроматографической камеры выстилают фильтровальной бумагой. Подвижную фазу наливают в камеру в количестве, достаточном для того, чтобы после смачивания фильтровальной бумаги покрыть дно камеры слоем жидкости, необходимым для хроматографирования. Для насыщения хроматографическую камеру с подвижной фазой закрывают крышкой и выдерживают в течение 1 ч при тем-пературы от 20 ᴼС до 25 ᴼС.
 Подготовка хроматографической камеры (2)
На дно камеры помещают бюкс со смесью 1 г калия перманганата и 10 мл соляной кислоты разведенной и насыщают камеру в течение 15 мин.
 Подготовка ТСХ пластинок со слоем силикагеля.
Перед использованием пластинки активируют с помощью нагрева в тер-мостате при температуре 120 ᴼС в течение 20 мин.

На линию старта предварительно подготовленной хроматографической пластинки Кизельгель 60 F254, размером (5х15) см с толщиной слоя 0,2 мм отдельно наносят 5 мкл испытуемого раствора и 2,5 мкл раствора сравнения.
После испарения растворителей из нанесенных проб пластинку помещают в подготовленную хроматографическую камеру (1) как можно более вертикально, наблюдая за тем, чтобы пятна или полосы находились выше поверхности подвижной фазы. Камеру закрывают, оставляют ее при температуре от 20 ᴼС до 25 ᴼС в защищенном от прямых солнечных лучей месте. Пластинку вынимают после того, как подвижная фаза пройдет 10 см от линии старта. Пластинку высушивают на воздухе до исчезновения запаха аммиака, помещают в хроматографическую камеру (2), которая насыщена хлором, и выдерживают в течение 5 мин, после чего выдерживают в сушильном шкафу в течение 3 мин при температуре от 100 ° С до 105 ° С до выветривания избытка хлора. Высушенную пластинку опрыскивают раствором о-толидина.
На хроматограмме испытуемого раствора, кроме пятна желтого цвета на линии старта (фенибут), может оказаться пятно с Rf около 0,75, что соответствует примеси 4-фенилпирролидона-2, площадь которого не должна превышать площадь пятна на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%).
Проверка пригодности хроматографической системы:
хроматографическая система считается пригодной, если хроматограмме раствора сравнения четко видн0 пятно.

ПРОБЛЕМА: пятно стандарта и субстанции не видно!
Может кто сталкивался с проблемой? Что делаем не так?
П.С. Производитель не ответил...

Если кто-то сможет поделиться нормальной рабочей методикой определения примесей в субстанции (фенибут) буду очень признательна!
Здравствуйте! У нас фенибут (субстанцию) анализируют таким же способом. Может дело в пластинке или с элюентом что-то не так? В этой методике много зависит от элюента.