| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ: проблема >>>
|
 |
|
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
 25.07.2017 // 9:05:36
Брошу 5 копеек.. 1. Обязательно использовать предколонку. 2. Поскольку промывка чистым ACN к успеху не привела, очевидно на колонке сидят водорастворимые ВМС(???) и, следовательно промывать от них следует 5-10% водным ACN при повышенной температуре с последующим градиентом до рабочего элюента. Уважаемый OldBrave! Предколонка применяется (описано в ответе г-ну Волгину), причем "съедает" 2000 т.т. По промывке большой концентрацией водной фазы - это хорошая мысль, стоит попробовать, спасибо. |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
25.07.2017 // 9:08:38
А что за ВМС у вас? Попробуйте промыть ацетонитрилом/водой с 0,05 или 0,1% трифторуксусной к-той градиентом с 5-10% ацетонитрила до 100 и обратно 2-3 раза, потом отмойте от кислой ПФ и проверьте. Уважаемый AA_Alex! Промывать чем-то кислым стрёмно, так как фенильная колонка, не самого последнего поколения, поэтому в кислых средах эти колонки имеют ограничесния в использовании. |
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
25.07.2017 // 10:16:24
Уважаемый AA_Alex! Промывать чем-то кислым стрёмно, так как фенильная колонка, не самого последнего поколения, поэтому в кислых средах эти колонки имеют ограничесния в использовании. Да ну, для этой колонки рабочий диапазон рН 2-7.5. Такой же у большинства С18, работаем на них в градиенте с 0.1% ТФУ. Ну если боитесь - возьмите муравьинку или уксусную. |
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
25.07.2017 // 23:57:44
Редактировано 1 раз(а) Попробую привести свои соображения. За их непогрешимость отвечать не берусь, поскольку много неясного. 1. Если Вы используете предколонку, то промывать основную колонку в обратном направлении я бы не советовал. Поскольку очень уж сильно удерживающиеся примеси должны задерживаться предколонкой. Кроме того, сорбент в любой колонке, используемой достаточно долго, хоть немного, но проседает. Пусть даже на 0,1 мм. Промывка в обратном направлении может стронуть слой сорбента в любом месте колонки с образованием каверны неизвестной конфигурации. Не факт, что дальнейшая работа в прямом направлении полностью закроет эту каверну. Кроме того, при движении слоя сорбента вдоль колонки неизбежно повредится пристеночный слой. И от раза к разу этот эффект будет усиливаться. Я бы стал промывать колонку изопропанолом, но так, чтобы давление не превышало 100 бар. Конечно в прямом направлении. (Да, это довольно долго. Но стоит того.) И при сильном ухудшении разделения домазывал бы верхнюю часть колонки сорбентом из выпакованной аналогичной колонки (убитой ранее). 2. Предколонка. Вот ее можно и нужно промывать в обратном направлении. Так как описано в предыдущих постах уважаемых участников обсуждения. И именно ее менять почаще при катастрофическом ухудшении разделения. То есть порядок такой: колонку после промывки тестируете по любому чистому стандарту, хоть в соответствии с тест-хроматограммой, прилагаемой производителем, хоть просто по бензолу. При необходимости домазываете, снова тестируете, потом собираете с предколонкой и уже систему проверяете в соответствии с валидацией. Если не проходит, меняете предколонку. Если опять не проходит, тогда уж, скрипя зубами и ругая меня, всю систему. 3. Выпаковка старой колонки. Только в обратную сторону и отбросив примерно 5 см от начала. Остатка Вам должно хватить очень надолго. 4. Домазка колонки. К выпакованному сорбенту добавляете изопропанол так, чтобы получилась творогообразная субстанция. Её наносите шпателем на конец открытой колонки с небольшой горкой (0,1-0,5 мм). Затем ЧИСТЫМ ПАЛЬЦЕМ очищаете металл конца колонки (торец и с боков) и закручиваете фиттинг. Без фанатизма. Это в том случае, если колонка "классической конструкции" с металлическим конусом. Если фиттинг накручивается прямо на трубку и фильтр внутри последней, все гораздо сложнее и приходится извращаться. Да, я бы еще посоветовал в случае "классической конструкции" на стык трубки с конусом намотать пару слоев ленты ФУМ. Дополнительно загерметизирует и чуть-чуть уменьшит мертвый объем. Почему чистым пальцем. Опыт показал. что другие материалы снимают излишек сорбента хуже. ЗЫ Если основная колонка просела больше, чем на 3 мм, смысла восстанавливать нет. Не получится. |
|
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
26.07.2017 // 10:36:39
Благодарю Вас, господин Волгин! Попробуем то, что в наших силах и возможностях, |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
