Форумы ANCHEM.RU: асимметрия пика

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

асимметрия пика >>>

Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: асимметрия пика

olga22222
Пользователь
Ранг: 4

16.08.2018 // 10:34:49

Помогите идеями, что бы еще такое сделать? Проблема: при трансфере методики получаю асимметрию пика 2,85 при норме до 2,5. Передающая сторона уверяет, что проблем нет с колонкой и они получают величину около 2 и меньше, что колонка не деградирует в течение нескольких лет. Пробовала и Шимадзу, и Вотерс - от хроматографа не зависит симметрия пика, т.е., как бы виновата колонка, но перепробовали 3 новые колонки, везде идет с первого закола симметрия 2,85 на растворе для определения пригодности. На станд. растворе тоже самое: 2,4, следом 2,6,третьяХГ- 2,8-2,9. Колонку, конечно, и мыли ,и готовили по-разному. ПФ: градиент ацетатного раствора рН3,4 и ацетонитрила. Ацетонитрил пр-ва Макрон. Может ли от него зависеть симметрия получаемых пиков?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

daemond91
Пользователь
Ранг: 78

16.08.2018 // 11:53:14

1. Какие конкретно колонки перепробовали (какие конкретные марки)?
2. Все ли пики на хроматограмме хвостят или только конкретные?
3. Какое именно вещество хвостит? Уж не ароматичесикй амин ли?
4. "Чистая" обращенка? Пробовали подавить силанольную активность сорбента?
5. Используете ли предколонку? Какую, какого размера, какой держатель?

olga22222
Пользователь
Ранг: 4

16.08.2018 // 13:38:32

Редактировано 1 раз(а)

daemond91 пишет:
1. Какие конкретно колонки перепробовали (какие конкретные марки)?
2. Все ли пики на хроматограмме хвостят или только конкретные?
3. Какое именно вещество хвостит? Уж не ароматичесикй амин ли?
4. "Чистая" обращенка? Пробовали подавить силанольную активность сорбента?
5. Используете ли предколонку? Какую, какого размера, какой держатель?[/quote
1-По НД колонка единственного вида Kinetex С18 2,6 мкм 150х4,6(феноменекс)-все должно быть по-прописанному.
2-нет, не все, а именно этот - основной (100%), с=0,5мг/мл
3- бендамустин, вообще-то кое-что там есть
4-да, градиент ацет. буфер с ацетонитрилом, что такое - подавить силанольную активность?
5-да, предколонка есть, та же, что и колонка 4х3, держатель стандартны, типа KJO-4282

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

16.08.2018 // 13:47:25

Редактировано 2 раз(а)

olga22222 пишет:

daemond91 пишет:
1. Какие конкретно колонки перепробовали (какие конкретные марки)?
2. Все ли пики на хроматограмме хвостят или только конкретные?
3. Какое именно вещество хвостит? Уж не ароматичесикй амин ли?
4. "Чистая" обращенка? Пробовали подавить силанольную активность сорбента?
5. Используете ли предколонку? Какую, какого размера, какой держатель?[/quote
1-По НД колонка единственного вида Kinetex С18 2,6 мкм 150х4,6(феноменекс)-все должно быть по-прописанному.
2-нет, не все, а именно этот - основной (100%), с=0,5мг/мл
3- бендамустин, вообще-то кое-что там есть
4-да, градиент ацет. буфер с ацетонитрилом, что такое - подавить силанольную активность?
5-да, предколонка есть, та же, что и колонка 4х3, держатель стандартны, типа KJO-4282
Уважаемая Ольга2222...! Запросите валидационные или верификационные материалы. Это прежде всего. И там Вы увидите истину - хвостил ли пик. Далее - попросите их колонку, на которой проводилась разработка и валидация. Если в Ваших условиях на их колонке все будет в норме - виновата Ваша колонка. А вообще, исходное требование к величине асимметрии 2,5 - это нонсенс. Максимум два!!! Значит, еще и разработчик "накосячил". О результатах напишите.
ДАЛЕЕ: ОЧЕНЬ ВАЖНО ВАШ БЕНДАМУСТИН - КАРБОНОВАЯ КИСЛОТА С ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ВОЗМОЖНОСТЬЮ ОБРАЗОВЫВАТЬ ЦВИТТЕР-ИОННОЕ СОЕДИНЕНИЕ ЗА СЧЕТ ТРЕТИЧНОГО АЗОТА В МОЛЕКУЛЕ. МОЖЕТ БЫТЬ У ВАС ЕСТЬ ВЕЛИЧИНА РКа БЕНДАМУСТИНА? Такие эффекты (аномальная асимметрия ) наблюдаются, когда величина рН ПФ близка к величине рКа аналита. Т.е. удерживается смесь ионизированной и неионизированной форм препарата. Ваш случай еще сложнее - кроме молекулы и аниона кислоты может присутствовать еще цвиттер-ионное соединение. Поэтому величина рН является суперкритической величиной.
Пока что, думаю, Вам достаточно информации для размышления и работы.

olga22222
Пользователь
Ранг: 4

16.08.2018 // 14:38:56

Спасибо, ваш ответ натолкнул на мысль подвигать чуть-чуть рН буфера и посмотреть, как это влияет (если влияет) на асимметрию, так как рКа этой прекрасной бут. кислоты я не найду ни на каких просторах.

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

16.08.2018 // 14:44:52

olga22222 пишет:
Спасибо, ваш ответ натолкнул на мысль подвигать чуть-чуть рН буфера и посмотреть, как это влияет (если влияет) на асимметрию, так как рКа этой прекрасной бут. кислоты я не найду ни на каких просторах.

И еще: теоретически что у Вас наблюдается: исходное значение рН буфера 3,4, добавили ацетонитрил - рН сдвинулось в щелочную сторону, использовали градиент, т.е. увеличили долю ацетонитрила - рН еще увеличилось. И таким путем Вы "доползли" до величины рКа аналита (т.к. он - кислота), и получаете для разделения смесь трех форм препарта (см. выше). С моей точки зрения, вариации с величиной рН должны помочь улучшить картину. Просьба: сообщите что получилось, уж не сочтите за труд.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

	ИК-Фурье спектрометр Thermo Scientific Nicolet iS10 ИК-Фурье спектрометр Nicolet iS10 разработан для лабораторий контроля качества, аналитических инспекций и криминалистических лабораторий.
	[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

daemond91
Пользователь
Ранг: 78

16.08.2018 // 14:51:31

Редактировано 3 раз(а)

olga22222 пишет:
рКа этой прекрасной бут. кислоты я не найду ни на каких просторах.

Bendamiustine pKa = 4.38
( www.drugbank.ca/drugs/DB06769 )

ИМХО: Я бы к чертям собачьим закислил подвижку до рН=2,5. Карбоксильная группу подавить, а амино-группа будет конкретно ионизирована. Ну и ладно))

Вы есть в ВК? Напишите мне: vk.com/daemond91

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

16.08.2018 // 15:01:44

Редактировано 1 раз(а)

daemond91 пишет:

olga22222 пишет:
рКа этой прекрасной бут. кислоты я не найду ни на каких просторах.
Bendamiustine pKa = 4.38
( www.drugbank.ca/drugs/DB06769 )

ИМХО: Я бы к чертям собачьим закислил подвижку до рН=2,5. Карбоксильная группу подавить, а амино-группа будет конкретно ионизирована. Ну и ладно))

Вы есть в ВК? Напишите мне: vk.com/daemond91

Молодец daemond91!!! Полностью согласен! Только понижение рН ПФ! рН ПФ сейчас почти идеально совпадает с рКа аналита - все три формы аналита благополучно удерживаются, если это можно так назвать.

olga22222
Пользователь
Ранг: 4

16.08.2018 // 18:13:19

Avet пишет:

daemond91 пишет:

olga22222 пишет:
рКа этой прекрасной бут. кислоты я не найду ни на каких просторах.
Bendamiustine pKa = 4.38
( www.drugbank.ca/drugs/DB06769 )

ИМХО: Я бы к чертям собачьим закислил подвижку до рН=2,5. Карбоксильная группу подавить, а амино-группа будет конкретно ионизирована. Ну и ладно))

Вы есть в ВК? Напишите мне: vk.com/daemond91
Молодец daemond91!!! Полностью согласен! Только понижение рН ПФ! рН ПФ сейчас почти идеально совпадает с рКа аналита - все три формы аналита благополучно удерживаются, если это можно так назвать.

Большое спасибо. Конечно, поделюсь результатом - одно но, на градиенте сильно рН не подвигаешь - еще ведь делим примеси.

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

16.08.2018 // 19:35:45

Если по чувствительности запас есть, то уменьшите объем вводимой пробы, например в 2 раза. Это самое простое и первое, что можно попробовать.


Ответов в этой теме: 9	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты