| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Аминокислоты с ортофталевым альдегидом! Нужна помощь! >>>
|
 |
| Автор | Тема: Аминокислоты с ортофталевым альдегидом! Нужна помощь! | ||
|
Listog Пользователь Ранг: 6 |
 08.04.2021 // 15:05:54
Здравствуйте, дорогие форумчане. Откликнитесь, пожалуйста, кто знает как определять АК в рыбной муке (рыбный гидролизат) с ортофталевым альдегидом! Интересует стадия пробоподготовка этого рыбного гидролизате для ВЭЖХ. Спасибо всем! |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Listog Пользователь Ранг: 6 |
10.04.2021 // 8:29:08
Неужели нет никого кто занимается такими объектами? Где же все хроматографические специалисты? |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
10.04.2021 // 11:01:35
Мука и гидролизат - разные вещи. Для определения аминокислот в муке нужно провести гидролиз, чтобы расщепить белки до свободных аминокислот. Гидролиз в таких случаях обычно проводят, используя 6 М HCl (можно с добавкой 0.1-1 % фенола для снижения потерь тирозина), при 110 градусах в течение 15-24 ч в герметичном сосуде, например запаянной ампуле. Гидролизат упаривают, разбавляют подходящим растворителем, например 0.1 М HCl, фильтруют. Далее ВЭЖХ. При таком гидролизе Trp разлагается, Asn и Gln переходят в Asp и Glu, а Cys с потерями переходит в цистин. Возможны частичные потери некоторых других аминокислот (Ser, Thr, Met, Tyr). Неполный гидролиз пептидных связей между некоторыми парами аминокислот с гидрофобными группами тоже может несколько исказить результаты. Если хотите делать ВЭЖХ именно с предколоночной дериватизацией ОФА, то рекомендую забыть про ручную дериватизацию (невоспроизводима), а делаеть ее, используя автосамплер хроматографа. Для пролина дополнительно потребуется реагент FMOC-Cl. См., например: https:// |
||
|
Listog Пользователь Ранг: 6 |
10.04.2021 // 12:28:54
VMU, благодарю! В связи с Вашим ответом, мне нужно уточнить, что образцы для анализа называются протеиновый гидролизат из рыб (разноцветные порошки как мука). Как они получены мне неизвестно, сказано было полностью готовы для анализа. Но вместе с ними рекомендовали ГОСТ-2013 (постколоночная дериватизация с нингидрином) на определение АК в кормах и сказали анализировать как кормовую муку!!! И мозг мой взорвался! После дискуссий решено было делать как обычно, то есть с ОРА+2-МЕ+FMOCCl, других возможностей просто нет и не будет. Теперь вопрос - как приготовить этот порошок для ВЭЖХ-анализа: растворить в воде/соляной кислоте и центрифугировать или проводить экстракцию? Тогда экстракция чем - солянкой, перхлоратом, цитратом??? Дело еще осложняется тем, что стандарт раствор АК (Sigma A9906) в 0,2Н цитратном буфере. По поводу ручной дериватизации - ДА, подтверждаю многолетним набиванием шишек!!! Только автосамплер!!!!!!! |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
10.04.2021 // 13:10:44
Полагаю, что в вашем образце все-таки имеются белки и короткие пептиды, которые надо гидролизовать, чтобы найти суммарное содержание аминокислот (если оно нужно вам, а не содержание только свободных аминокислот). Если готовой методики нет, ее придется разрабатывать. Пробуйте разные варианты (просто экстракция в разбавленную соляную кислоту, гидролиз) и сравнивайте, что получается. Стандартов АК вагон и маленькая тележка. Хоть по отдельности чистые вещества покупайте, хоть готовые смеси-растворы, например Sigma-Aldrich AAS18, A9781, 79248, Agilent 5061-3330 - 5061-3334. Если стандарт разбавляется, то исходный растворитель (солянка ли, цитратный буфер ли) неважен. Указанный вами стандарт A9906 содержит кучу не актуальных для вашей задачи дополнительных компонентов и предназначен для анализов физиологических жидкостей, где эти компоненты бывают. |
||
|
Listog Пользователь Ранг: 6 |
10.04.2021 // 13:27:03
Понимаю, что стандарт не к месту, но какой дали. Угнетает, что придется методом тыка все распознавать в нем ((( Как видите, мои возможности ограничены, исхожу из них. А работу надо сделать к 15 апреля, за неделю и методу разработать, варьируя все и образцы изучить! Просто смешно! Пойду по простому пути, через солянку, а когда будет время сделаю по человечески! СПАСИБО! |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
10.04.2021 // 13:52:20
Редактировано 1 раз(а) Если многолетний опыт дериватизации с OPA и ВЭЖХ у вас имеется, то должны быть и иные стандарты аминокислот, а также хоть какие-то отработанные условия ВЭЖХ, для которых известно, кто где элюируется (по крайней мере для 18 аминокислот). Вопрос, сможете ли вы в принципе разделить компоненты этой стандартной смеси в виде OPA/ME(+FMOC)-производных так, чтобы нужные вам аминокислоты не накладывались на ненужные вам компоненты. В варианте катионообменной хроматографии с литий-цитратной системой градиентного элюирования да с программированием температуры эти компоненты делятся (далее - послеколоночная дериватизация нингидрином и детектирование на 570 и 440 нм). |
||
|
Listog Пользователь Ранг: 6 |
10.04.2021 // 14:20:49
Редактировано 1 раз(а)
Благодарю за подсказку!!! |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
