| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN >>>
|
 |
| Автор | Тема: НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN | ||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
 23.11.2021 // 22:56:40
Редактировано 2 раз(а) Дорогие коллеги, имею спросить: нормально ли, что пик чистого н-гексана на 250*4,6 (5 мкм) колонке CN при подвижной фазе н-гексан : ацетон 60:40 и потоке 1 мл/мин (изократика) наблюдается в районе 7,9-8,1 мин?.. Смущает, ибо "системный пик" на С-18 такой же длины в районе 3-4 минут Второе: чем, помимо ацетона можно безопасно для колонки и удобно варьировать элюирующую силу ПФ, если речь идет об анализе моно-, ди- и триацилглицеринов? Подозреваю, что даже 100% ацетона может оказаться маловато ( Идей кроме этилацетата нет (но коллеги говорят, он слабокислый и будет модифицировать силикагель, т.е. не самый удачный выбор).. но, если верить Сычеву, он не сильно обходит ацетон по элюирующей силе.., а изо-пропанол хоть и смешивается с гексаном, крайне неудобен своей способностью модифицировать силикагель ( |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
24.11.2021 // 14:50:06
Редактировано 1 раз(а) И ещё вопрос: при работе с такой летучей органикой в качестве ПФ, есть ли какие лайфхаки по выходу на режим после ночного простоя?.. бывает по часу и дольше приходится делать purge, повышать/понижать скорость потока, чтобы избавиться от пузырей под плунжерами.. причем, проблема только у насоса, который качает гексан это просто пытка какая-то на этапе, когда изократический поток приходится формировать в режиме бинарного градиента при постоянных значениях долей насосов А и В |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
24.11.2021 // 15:34:28
ЛАЙФХАК )) Если наблюдается такая хреномудия как у нас, то спасло сегодня вот что: по очереди включал 100% насоса А или В. Они по очереди не хотели качать и создавать давление ))) В итоге, когда один из них выдал стабильное давление, в 2 приёма довел долю насоса до нужного значения. Работает теперь стабильно. |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
24.11.2021 // 21:35:41
Редактировано 1 раз(а) Такое возможно. Гуглите "vacancy chromatography", "вакантная хроматография", "minor disturbance method". Детектор-то какой? Рефрактометр? Какой такой способностью модифицировать силикагель? У вас и так модифицированный силикагель с привитыми цианопропильными группами. Можете хоть воду в ПФ добавлять (естественно, с другим, смешивающимся с водой и гексаном растворителем). Оставляйте на ночь на малой скорости потока, а не выключайте насос. Кто вас заставляет? Смешивайте вручную и качайте готовую смесь. Дегазатор-то в приборе имеется? А "ручными" способами дегазируете растворители? А у вас система градиента высокого давления (с двумя насосами {обычно они объединены в один блок, но фактически их два}) или же система градиента низкого давления (один насос и смеситель перед ним)? |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
25.11.2021 // 14:09:13
Спасибо, погуглю! Да, рефрактометр.
Скорее всего, я неудачно выразился.. но наблюдал, как при работе с ПФ н-гексан:2-пропанол 95-5 об/об давление в колонке стабильно росло вверх.. потом пришлось ацетоном несколько часов отмывать её от спирта ( так как стало понятно, что этот вариант не годится ( Спасибо, попробую!
Я уже думал об этом.. и, оценив затраты ПФ при включении прибора, возможно и есть смысл просто смешивать самому.. В бинарном градиенте решил, будет проще найти оптимальную ПФ и потом уже мешать её.. "Дегазатор мембранный вакуумный DGU-20A5r" стоит на каждом насосе.
У нас два насоса и к одному дополнительно подключен смеситель FCV-20AL |
||
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1330 |
25.11.2021 // 17:09:02
Редактировано 12 раз(а) AOCS Method Ce 5c-93, детектор RI: Колонка Ultracarb 3u ODS (20) 250x4,6 mm s/n 391660-1, Phenomenex, cat.00G-0205-E0, можно заменить на 150х4,6 mm; Температура колонки: 20C (ambient temperature); Элюент А (изократически): ACN - ацетон 30 : 70 v/v в течение 80 мин; При анализе кристаллизаторов лучше использовать 100% ацетон или поднять темп. колонки до 40С. Подготовка системы: 60 мин при 60С (колонка) - промывка колонки с последующим охлаждением до комнатной температуры; Кондиционирование: 30 мин. - уравновешивание RI; Поток: 1,0 мл/мин (поток можно уменьшить до 0,8 мл/мин); Объем пробы: 5 мкл; Проба: 1,50 г жира/25 мл раствора (0,5г/10мл, 50мг/мл) в ацетоне или смеси ацетон - хлф. 4:1, или, что еще лучше, смеси гекс-i-PrOH 1:4 или 2:1(что хуже); Детектор: RI. Температура ячейки детектора - комнатная или 40С. Моно- и ди- частично перекрываются, требуется калибровка. Лично я от этого метода давно отказался. Еще лучшее разделение получается другим методом с использованием градиента четырех компонентного элюента (EtOH, ACN, ацетон, гексан) и ELSD: |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
25.11.2021 // 18:09:01
про ELSD я давно мечтаю и, возможно, в следующем году специально под липидомику закупим такую машинку.. У меня получается, что ТАГ выходят раньше пика растворителя! Это нормально?.. Я что-то растерялся даже.. потом что перед пиком чистого гексана идет второй, я сделал разведение стандарта триолеина гексаном -- и пик перед ним уменьшился.. (ПФ гексан:ацетон 1:1) |
||
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1330 |
25.11.2021 // 18:24:12
Редактировано 5 раз(а) Колонки с CN-фазой непригодны для анализа TAG. При использовании RI с элюентом гекс-ацетон используют колонки с обратной фазой с макс. кол-вом углерода (макс. гидрофобности). Давно установлено, что с детектором RI не удается добиться устойчивой базовой линии при формировании изократического потока в режиме бинарного градиента. Проблема решается при использовании предварительно приготовленного элюента и подачей его через оба насоса в соотношении 1:1, либо через один насос. Для группового разделения TAG-, DAG-, MAG- и своб. жирные к-ты удобно использовать HILIC (diol), градиент элюентов и ELSD. Условия разделения те же, что и для фосфолипидов: |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
26.11.2021 // 0:08:40
Да, я знаю, что бинарный градиент не годится для рефрактометра -- сейчас я его использую, чтобы понять, какой элюент готовить предварительно, т.е. как только подберу соотношение элюентов, чтобы ТАГ видеть одним пиком в разумное время, перейти на изократический режим через один насос. ELSD пока нет.. приходится работать с тем, что есть :/
У меня стоит задача получить ТАГ одним пиком, чтобы была возможность собрать его коллектором фракций. Неужели CN не годится для этой цели? Есть ещё колонка Luna Silica -- с голым силикагелем.. но с ней очень неудобно было работать из-за большого времени уравновешивания, и тут на форуме когда-то и посоветовали CN взять.. А так да, я использовал гексан:ацетон на С-18 для деления ТАГ по углеродному числу и т.д. Спасибо большое за рекомендации. |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
26.11.2021 // 15:37:09
Попробовал на ночь оставить поток 0,01 мл/мин: давление на первом насосе было 0,1МПа, на втором -0,1МПа. Снова который час подряд пытаюсь добиться устойчивого давления в насосе, где чистый гексан (( Нечто невозможное просто ((( |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
26.11.2021 // 17:45:45
Оставляйте на 0,05-0,10 мл/мин. Кстати, у вас насос-то вообще допускает длительную работу с гексаном? На аджилентовских насосах, например, для регулярной работы с такими растворителями ставят уплотнения (сальники) плунжеров из материала, отличного от того, что используют для водно-органических работ. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 52
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
