| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Методики дериватизации холестерина >>>
|
 |
| Автор | Тема: Методики дериватизации холестерина | ||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
 04.07.2006 // 12:41:26
Редактировано 1 раз(а) Уважаемые форумчане, поскольку мой пост о билирубине и холестерине в желчных камнях канул в Лету безинформативно для меня, хочу спросить вас (может быть кто занимался ?) о методиках дериватизации холестерина. Ибо с пигментами я разобрался и вроде бы все получается (диглюкуронид билирубина -> билирубин неконьюгированный и наконец моноглюкуронид). А вот имея в распоряжении только Милихром-4 и Цвет-500М с ДПР ума не приложу как быть с холестерином. ВЭЖХ - ?, но отвратительная чувствительность к холестерину, да всякая дрянь из камней (матрица мешает), да и специфических реагентов, о которых когда-то упоминал "Островитянин"(Islander)у меня нет. Исходя из этих скудных возможностей, что можно предложить мне для анализа этих самых камней на содержание холестерина? Есть мысль трифторацетилировать и на ГЖХ с ДПР. Опровергните мои размышления или дайте дельный совет. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
lyo89 Пользователь Ранг: 136 |
06.07.2006 // 22:19:00
Вам книга Гёрег "Количественній анализ стероидов" доступна? А вообще, холестерин и без дериватизации прекрасно летит(240 град, капиляр), но свотреть на ПИДе все таки. Но я думаю, что для определения в камнях и спектрофотометрически попробовать можно |
||
|
Олег Пользователь Ранг: 529 |
07.07.2006 // 12:38:59
Игорь посылал несколько раз письмо по электронке, но не дошло. Есть стандартная методика определения хлестерина и набор (CHOL 150). По этой методике можно ацилировать (ТФА), а дальше уже Ваш путь -ГЖХ. Можно и ТСХ, а количественно - тебе карты в руки. Приготовление пробы и нанесение. Вытяжку плазмы крови готовят следующим образом: 1 мл. сыворотки крови смешивают с 16 мл. смеси хлороформ- метанол (1:1) и некоторое время нагревают на кипящей водяной бане. По охлаждении до комнатной температуры объем смеси доводят хлороформом до 25 мл и после тщательного перемешивания фильтруют. 5 мл. экстракта смешивают с 1 мл 0,02%-ного раствора хлорида кальция и интенсивно перемешивают. После 8-16 ч. расслаивание смеси воднометанольный слой удаляют, а нижний слой, соответствующий 15 мкл плазмы, выпаривают досуха в атмосфере азота. Остаток растворяют в 10 мкл смеси н- пропанол- хлороформ- метанол (3:2:1) и наносят на хроматограмму в виде полоски 1,5 см. Хроматографирование: хроматограмму трижды элюируют смесью н- гентан- толуол (8:2) без предварительного насыщения камеры парами растворителя на расстояние 16 см от старта; между отдельными элюированиями хроматограмму высушивают при комнатной температуре. Обнаружение. После высушивания пластинку опрыскивают раствором 20 г сульфата аммония в 100 мкл дистиллированной воды с добавлением 4 мл концентрированной серной кислоты. Хроматограмму сначала сушат в токе горячего воздуха, а затем нагревают в течение 45 мин при 200ºС. Количественное определение. Производят путем денситометрирования окрашенных пятен. |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
07.07.2006 // 14:34:04
Уважаемый Олег, я не получал писем к сожалению. Был бы рад узнать по подробнее про трифторацетилирование холестерина. Потому как нашел методики только силирования. Но дело в том, что лаборатория у меня сугубо пестицидная. Т.е ГЖХ "Цвет-500", насадочные колонки с SE-30,OV-101, OV-17 и ДПР - детектор. Так что размахнуться на капиллярку и на что-то особенное не позволяет бюджет организации. ПИДа тоже нет, вернее он есть, но нет генератора водорода. А за методу ТСХ, спасибо. Это как альтернатива. Я об этом думал, но заказчик морочил мне голову ВЭЖХ. Я на своем Милихроме-4 попробовал.... Отвратительно ! Пигменты (билирубин)- все Ок, а холестерин - зер шлехт ! Вот и родилась мысля, располагая ангидридом получить дериват, видимый для ДПР. Перерыл весь Инет и ничего кроме ТСХ , силирования, динитрофторбензилирования и без деривации не нашел. Поэтому прошу тебя, попробуй переслать еще раз на мейл igor_pin{coбaчkа}mail.ru. |
||
|
lyo89 Пользователь Ранг: 136 |
09.07.2006 // 16:54:05
трифторацетат: Rozanski A. Anal Chem 1966v38p36 гептафторбутират Poole C.F. Org. Mass spectrom 1975v10p537 Попробуйте провести реакцию в бензоле(ТГФ) при избытке гептафтормаслянного(трифоруксусного) ангидрида. Да, вам необходимо определить свободный холестерин и/или его эфиры и/или его метаболиты(желчные кислоты)? |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
12.07.2006 // 13:19:40
Мне нужно определить сам холестерин. По крайней мере заказчик считает, что желчные камни в зависимости от ситуации состоят из билирубина (его коньюгатов) и холестерина. Действительно, образцы камней из желчных протоков пестрят своей цветовой гаммой (от беловато-кремового до ржавчино-подобного). Меня интересуют работающие методики ацилирования холестерина (желательно трифторацетилирования, поскольку оный реагент у меня имеется). И возможен ли такой процесс для холестерина? Ибо в литературе нашел анализы без дериватизации, динитрофторбензилирование, силирование БСА, и ..... реакцию Либермана-Букхарда с уксусным ангидридом. Но честно говоря последняя реакция - цветная и идет как с холестерином, так и с его эфирами. Поэтому предполагаю, что с ангидридом идет какая-то конденсация (механизма реакции я так и не нашел, чтобы сделать вразумительные выводы). Попробовал трифторацетилирование нахрапом по методе для ацилирования трихотеценовых токсинов (Т2). Там используется раствор в бензоле с карбонатом натрия без нагрева. Результат нулевой. По идее холестерин, как спирт реагировать с ТФА должен, но ..... и в литературе вакуум. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
lyo89 Пользователь Ранг: 136 |
02.08.2006 // 13:45:54
Нахрапа - это хорошо  ! Попробуйте после экстракции растворитель прсушить и добавить каталитические к-ва ацетата натрия.Но вот, положим, "Современные методы органической химии" Физера ммм 1960 г(нда - слово современные -в названии всегда в кайф). Желчные камни(2г) экстрагируют диоксаном(10мл) при нагревании. Фильтруют рабаляют метанолом(10мл) и осветляют норитом. добавляют немного воды для насыщения и оставляют на кристализацию - чем не весовой метод? А вот собственно ацетилирование(уксусный анг заменим на ТФА): обливают 0,5 г. холестерина 5 мл уксуснойк-ты перемешиваит получается паста молекулярного соединения С27Н45ОН*СН3СООН. добавляют 1 мл уксусного(ТХУ, ТФУ ОК!) ангидрида и нагревают смесь на водяной бане 15-60мин. охлаждают разбавляют водой и экстрагируют эфиром. эфирный экстр пром 2 раза водой и один раз 10% NaOH.сушат отгоняют эфир. Ну далее идет очистка на колонке - для целей аналитики - в сад. |
||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
03.08.2006 // 12:04:07
Игорь! А ведь холестерин и сам хорошо летит. По методике ЕР его определяют ГЖХ. Может попробовать экстрагировать в гексан, а далее по методике ЕР? |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
03.08.2006 // 12:57:15
Уважаемый Артем,мука моя заключается в том, что приборная база не позволяет элементарного биохимического исследования. Из ВЭЖХ - Милихромы-4,1 и из ГЖХ - Цвет-500М с ДПР. А для холестерина ГЖХ без дериватизации нужен ПИД (чего у меня пока нет). Вот и изощряюсь как могу. Но решение я нашел стандартное - ТСХ с денситометрией после проявления 5% фосфорномолибденовой кислотой. Клиент согласен и даже доволен. Наверное решил приукрасить диссер чем то экзотическим типа ВЭЖХ, а сам - хирург. Но я его убедил сделать ЭТО , то бишь ТСХ. Получилось прекрасно, да и отчет впечатляет его. Так что спасибо всем за советы.
|
||
|
Lucap Пользователь Ранг: 110 |
05.08.2006 // 20:23:11
Редактировано 1 раз(а) Введение хлора в молекулу холестерина с одновременным элиминированием гидроксила можно осуществить реакцией с хлористым тионилом. К раствору в хлороформе или дихлорэтане добавляют SOCl2 и выдерживают в течение часа при комнатной температуре. Избыток растворителя перед анализом можно (нужно) отогнать. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 9 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
