Форумы ANCHEM.RU: Пики поменялись местами (ВЭЖХ, С18, спекторофотометрический детектор)

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Пики поменялись местами (ВЭЖХ, С18, спекторофотометрический детектор) >>>

  Ответов в этой теме: 11
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Пики поменялись местами (ВЭЖХ, С18, спекторофотометрический детектор)

Pearsontano
Пользователь
Ранг: 22

05.07.2024 // 10:28:16

Добрый день, коллеги!
Работаем по методике ГОСТ EN 12856-2015. Методика обкатанная, верифицированная. На хроматографе LicArt 62, по непонятной причине, пики сорбиновой и безойной кислот начали меняться местами. Сорбиновая всегда выходила первой (молярная масса 112 г/моль), а бензойная второй (122 г/моль).
Работаем по этой методике больше 2-х лет, такой проблемы больше не возникало. И тут на хроматограмме резкие изменения, аналит выходит наоборот. Никаких параметров не изменяли, колонка С18, подвижная фаза: 80:15:5 (H2O, ACN, 1%H3PO4). pH всегда постоянная. На другом хроматографе при таких же параметрах выходит все нормально, как и должно быть.
В чём может быть проблема?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

05.07.2024 // 14:43:02

Редактировано 2 раз(а)

Элюент смешиваете вручную или насосом? На проблемном приборе раньше порядок был нормальным или сразу на нем другой? Площади пиков и времена удерживания на проблемном приборе стабильны в течение серии из нескольких вводов? Точно порядок поменялся? (Растворы веществ по одному кололи?) Колонка термостатируется?

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

05.07.2024 // 15:05:18

Pearsontano пишет:
Добрый день, коллеги!
...по непонятной причине, пики сорбиновой и безойной кислот начали меняться местами. ...Никаких параметров не изменяли, колонка С18, подвижная фаза: 80:15:5 (H2O, ACN, 1%H3PO4). pH всегда постоянная...
В чём может быть проблема?

В ОФХ "...пики сорбиновой и безойной кислот начали меняться местами..." - известное поведение. Секрет прост, рН должен быть не больше 3,5.

Pearsontano
Пользователь
Ранг: 22

05.07.2024 // 15:34:41

vmu пишет:
Элюент смешиваете вручную или насосом? На проблемном приборе раньше порядок был нормальным или сразу на нем другой? Площади пиков и времена удерживания на проблемном приборе стабильны в течение серии из нескольких вводов? Точно порядок поменялся? (Растворы веществ по одному кололи?) Колонка термостатируется?

Смешивается насосом, градиент.
Порядок раньше был нормальным, площади стабильны, время - нет.

Pearsontano
Пользователь
Ранг: 22

05.07.2024 // 15:35:32

OldBrave пишет:

Pearsontano пишет:
Добрый день, коллеги!
...по непонятной причине, пики сорбиновой и безойной кислот начали меняться местами. ...Никаких параметров не изменяли, колонка С18, подвижная фаза: 80:15:5 (H2O, ACN, 1%H3PO4). pH всегда постоянная...
В чём может быть проблема?
В ОФХ "...пики сорбиновой и безойной кислот начали меняться местами..." - известное поведение. Секрет прост, рН должен быть не больше 3,5.

По методике pH - 4,3.
Попробуем снизить до 3.

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

05.07.2024 // 16:30:48

Pearsontano пишет:
По методике pH - 4,3.

Вы для своей ПФ его измеряли? У вас 0.05 % фосфорной в смешанной ПФ. Считать лень, но сдается мне, что реальный pH там ближе к 3. Ищите проблему с системой подачи ПФ. Амплитуда колебаний давления в норме? У вас именно градиент или просто смешение трех компонентов в изократике?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Высокотемпературная лабораторная электропечь SNOL 4/1100
Электропечь SNOL 4/1100 предназначена для сушки и термообработки различных материалов в воздушной среде при температуре от 50 °С до 1100 °С. Рабочая камера электропечи выполнена из керамики. Нагревательные спирали находятся в пазах, то есть частично открыты.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

06.07.2024 // 18:59:13

Редактировано 1 раз(а)

Pearsontano пишет:
По методике pH - 4,3.
Попробуем снизить до 3.

Немного погорячился, рН должен быть 4,5, - стабильные условия:
Колонка: Luna 5u C18(2) 100А 150x2,0мм (Phenomenex);
Предколонка: SecurityGuard C18 4x2,0мм (Phenomenex);
Температура колонки: 50C;
Элюент: A = ACN;
B = 25 mM AcONa. (3,4г AcONa*3H2O/л + 2,4мл AcOH(лед.), рН = 4,5)
Изократически: B - 80%, A - 20%.
Время записи хроматограммы: 6-10 мин.
Начальное кондиционирование в теч. 15 мин.
Поток: 0,4 мл/мин.
Объем пробы: 10 мкл.
Длина волны детектора: 235 нм.
BzOH - 3,2 мин,
SorbOH - 4,4 мин.

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

06.07.2024 // 19:31:59

OldBrave пишет:
Немного погорячился, рН должен быть 4,5, - стабильные условия

Во избежание проблем с формой пиков и временами удерживания в приличных домах принято использовать ПФ с pH, отличающимся от pK_a аналитов хотя бы на единицу.
pK_a сорбиновой 4.76,
pK_a бензойной 4.20...

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

09.07.2024 // 17:51:28

Редактировано 2 раз(а)

vmu пишет:
Во избежание проблем с формой пиков и временами удерживания в приличных домах принято использовать ПФ с pH, отличающимся от pK_a аналитов хотя бы на единицу.
pK_a сорбиновой 4.76,
pK_a бензойной 4.20...

Проходили уже. Вам шашечки или ехать? МВИ аттестована в ЦСМ. Сомневающимся - флаг в руки...

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

09.07.2024 // 18:24:43

OldBrave пишет:
Вам шашечки или ехать?

Мне без разницы. О авторе темы и иных читателях форума я беспокоюсь. Про pH вы завели разговор, сначала предложив разумный pH 3.5 для данных аналитов, а затем переиграв на сомнительный pH 4.5, причем с ацетатным буфером, который на 235 нм, например, даст шум несколько более высокий, чем раствор фосфорной кислоты или фосфатный буфер. Допускаю, что даже с pH 4.5 пики у вас делятся, но выбор такой ПФ для этой задачи не является хорошим примером для начинающих хроматографистов.

OldBrave пишет:
МВИ аттестована в ЦСМ.

А у автора целый ГОСТ. Обкатанный, верифицированный. И даже как-то они работают без ацетата. Нафига им пробовать ваш ацетат? Проблема у них все-таки с прибором, а не с ПФ.

Pearsontano
Пользователь
Ранг: 22

10.07.2024 // 9:10:40

vmu пишет:

Pearsontano пишет:
По методике pH - 4,3.
Вы для своей ПФ его измеряли? У вас 0.05 % фосфорной в смешанной ПФ. Считать лень, но сдается мне, что реальный pH там ближе к 3. Ищите проблему с системой подачи ПФ. Амплитуда колебаний давления в норме? У вас именно градиент или просто смешение трех компонентов в изократике?

Добрый день! Да, измеряли, pH выдерживаем строго 4,3.
К насосу у нас тоже есть вопросы и недоверие, прибор - LicArt62. У нас именно градиент.


Ответов в этой теме: 11 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты