Форумы ANCHEM.RU: Феномен в HPLC - увеличение площади пика при ументшении потока

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Феномен в HPLC - увеличение площади пика при ументшении потока >>>

  Ответов в этой теме: 29
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

leshich
Пользователь
Ранг: 69

11.01.2007 // 12:26:08

Редактировано 2 раз(а)

Леонид пишет:
Нет. Не так!
С какого такого перепугу высота пика должна стать меньше? Если концентрация вещества на выходе из колонки одинакова, то и его поглощение будет одинаково вне зависимости от скорости потока.
А то, что площадь пика пропорциональна концентрации справедливо только при одинаковых условиях эксперимента. Опять же в чем мерять площадь (см. дополнение к моему первому посту).

Но и увеличиваться высоте пика тоже вроде не с чего?!
Теперь про размерность - да, площадь измеряется в мВ*с, но по сути, существует прямо пропорциональная зависимость между временем и скоростью потока - мл/мин, или мл/с, если хотите, то есть площадь можно измерить и в мВ*мл.
Так, постороил табличку в мВ*мл
s - ml/min- ml/s - ml - mB- mB*ml
7,5 - 2 - 0,033 - 0,25 - 60 - 15,0
9 - 1 - 0,017 - 0,15- 100- 15,0
12 - 0,5 - 0,008 - 0,1 - 150 - 15,0
Площадь в мВ*мл оказалась одинаковая во всех трех случаях. Кажется, дошло

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

leshich
Пользователь
Ранг: 69

11.01.2007 // 12:34:34

Раз это действительно так и все правильно, при уменьшении скорости потока площадь пика увеличивается, то отсюда должен следовать один простой вывод:
При небольших концентрациях веществ скорость потока надо устанавливать как можно меньше, если это конечно не мешает разделению, чтобы добиться большего по площади пика. Правильно?

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

11.01.2007 // 12:46:24

leshich пишет:
Раз это действительно так и все правильно, при уменьшении скорости потока площадь пика увеличивается, то отсюда должен следовать один простой вывод:
При небольших концентрациях веществ скорость потока надо устанавливать как можно меньше, если это конечно не мешает разделению, чтобы добиться большего по площади пика. Правильно?

Опять не правильно!
Исходя из уравнения Ван-Деемтера и соответствующей ему кривой, для данной хроматографической системы существует оптимальная скорость, при которой эффективность разделения максимальна. Исходя из этой же зависимости для наименьшей потери эффективности выгодней работать при несколько большей скорости элюента, нежели это оптимальное значение. Тут выигрыш - меньшее время анализа.
Работа при слишком малых скоростях не выгодна вдвойне. Затягивается время анализа, да еще падает эффективность разделения.
Чувствительность существенно при этом не меняется.

leshich
Пользователь
Ранг: 69

11.01.2007 // 12:49:55

Редактировано 1 раз(а)

Леонид пишет:

leshich пишет:
Раз это действительно так и все правильно, при уменьшении скорости потока площадь пика увеличивается, то отсюда должен следовать один простой вывод:
При небольших концентрациях веществ скорость потока надо устанавливать как можно меньше, если это конечно не мешает разделению, чтобы добиться большего по площади пика. Правильно?
Опять не правильно!
Исходя из уравнения Ван-Деемтера и соответствующей ему кривой, для данной хроматографической системы существует оптимальная скорость, при которой эффективность разделения максимальна. Исходя из этой же зависимости для наименьшей потери эффективности выгодней работать при несколько большей скорости элюента, нежели это оптимальное значение. Тут выигрыш - меньшее время анализа.
Работа при слишком малых скоростях не выгодна вдвойне. Затягивается время анализа, да еще падает эффективность разделения.
Чувствительность существенно при этом не меняется.

Но если пики очень маленькие, и ради увеличения площади для количественного определения можно бы было пожертвовать временем, плюс эффективность не сильно пострадала, таки да, нужно снижать скорость потока? И как же чуствительность не сильно меняется - на этом примере мы увидели увеличение площади в 2 раза при двухкратном снижении скорости потока?

DSP007
VIP Member
Ранг: 2228

11.01.2007 // 12:56:05

Ни фига подобного, вырастет вдвое время анализа, но вырастет вдвое и количество случайных флуктуаций базовой линии в ходе анализа.Так что площади маленьких пиков все равно будут скакать как бешеные козы.
Хуже того, Вы видимо еще не имеете большого навыка обработки хроматограмм,глаз еще не наметан. Для Вас (визуально) маленький пик на ленте или на экране будет выглядеть как дрейф базовой линии. Знаю по своему опыту.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Центр коллективного пользования "Состав вещества" ИВТЭ УрО РАН
Центр выполняет по договорам аналитические исследования по элементному и вещественному анализу методами плазменно-эмиссионной спектроскопии, рентгенодифрактометрии, сканирующей электронной микроскопии, рентгеноспектральному и Рамановскому микроанализу на современном оборудовании

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

11.01.2007 // 12:57:28

Редактировано 1 раз(а)

Как мы уже выяснили, высота пика не изменится. А именно высота пика в мВ и характеризует ту минимальную концентрацию вещества, отклик детектора на которую можно интерпретировать как пик.
Обычно принимается высота в 2-3 раза большая уровня флуктуационных шумов на базовой линии.
А если детектор выдает такую (или бОльшую)величину сигнала, то площадь интегратор уж посчитает при любой скорости элюента.
Лучше уж выбрать аттенюацию сигнала поменьше или масштаб отображения хроматограммы побольше.

leshich
Пользователь
Ранг: 69

11.01.2007 // 13:15:05

Леонид пишет:
Как мы уже выяснили, высота пика не изменится. А именно высота пика в мВ и характеризует ту минимальную концентрацию вещества, отклик детектора на которую можно интерпретировать как пик.
Обычно принимается высота в 2-3 раза большая уровня флуктуационных шумов на базовой линии.
А если детектор выдает такую (или бОльшую)величину сигнала, то площадь интегратор уж посчитает при любой скорости элюента.
Лучше уж выбрать аттенюацию сигнала поменьше или масштаб отображения хроматограммы побольше.

Почему тогда я наблюдаю увеличение высоты пика (см. табличку в начале) - из-за разностей градиента? ОК, тогда возможно при условии изократики высота не увеличивается.

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

11.01.2007 // 13:22:26

leshich пишет:

Леонид пишет:
Как мы уже выяснили, высота пика не изменится. А именно высота пика в мВ и характеризует ту минимальную концентрацию вещества, отклик детектора на которую можно интерпретировать как пик.
Обычно принимается высота в 2-3 раза большая уровня флуктуационных шумов на базовой линии.
А если детектор выдает такую (или бОльшую)величину сигнала, то площадь интегратор уж посчитает при любой скорости элюента.
Лучше уж выбрать аттенюацию сигнала поменьше или масштаб отображения хроматограммы побольше.
Почему тогда я наблюдаю увеличение высоты пика (см. табличку в начале) - из-за разностей градиента? ОК, тогда возможно при условии изократики высота не увеличивается.

В изократе высота меняться не будет, поскольку объем элюента, содержащего сорбат не меняется, а значит концентрация его на выходе тоже неизменна.
А при изменении градиента как раз и меняется объем элюента, необходимый для вымывания данного вещества из колонки. Чем круче градиент, тем этот объем меньше, а соответственно выше концентрация сорбата в элюате.

leshich
Пользователь
Ранг: 69

11.01.2007 // 13:41:11

Вроде наконец разобрался

Спасибо за разъяснения, Леонид, и спасибо всем откликнувшимся.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

15.01.2007 // 19:02:54

Есть такая быль даже от весьма уважаемых хроматографистов. Работа была по изучению разложения исследуемого вещества на неподвижной фазе - нашли на хроматограмме примесюшку, и начали снижать скорость - а площадь-то... увеличивается! Вот вам и кинетика распада! Как вы думаете, каков был порядок реакции?


Ответов в этой теме: 29 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты