| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
концентрация белка >>>
|
 |
| Автор | Тема: концентрация белка |
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
 12.01.2007 // 10:28:29
Кто-нибудь работает с фосфомолибденовольфрамовым реагентом для определения концентрации белка? Это модификация метода Фолина? Какие вещества могут давать ложноположительные реакции? |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
12.01.2007 // 13:39:20
Да, это модификация метода Лоури, но "тараканы" у него такие же. На развитие окраски мешают : 1. Трис-глициновый буфер (0,2 мМ) 2. Цистеин, дитиотреитол (0,01-0,4 мМ). 3. Аскорбинка. 4. ЭДТА (0,5 мМ). 5. Детергенты (тритон Х-100). 6. Сернокислый аммоний (0,15 %) 7. Сахароза (10 %). И др. В связи с этим калибровочный график строят используя в качестве холостой пробы раствор предполагаемых примесей. В некоторых случаях предпочтительно осаждение белка ТХУ, а затем перерастворением его в щелочных растворах или диализ и гель-фильтрация. Предпочтительнее , как на меня метод Бредфорда с Кумасси синим. Да и чувствительность выше (1-10 мкг/мл) и нет влияния на окраску всех вышеперечисленных веществ. |
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
12.01.2007 // 14:16:24
Да, душевненько. Спасибо за подробный ответ, а с Бредфордом у нас проблемы из-за твина-20 в нашем образце. Тут просто неадекватное развитие окраски, так что холостой образец в виде буфера совершенно бессмысленный. |
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
12.01.2007 // 15:08:25
Ну тогда попробуйте модификацию биуретового метода с реактивом Бенедикта (микрометод). В описаловке на него о мешающем действии разной бадяги - ни-ни. Простенько и со вкусом. Диапазон определения 0,1-2 мг белка. Либо вот такую заморочку с Лоури : Реактивы : 1.Изоамиловый спирт. 2.Хлороформ. 3. Реактивы для определения белка по Лоури. Ход определения : 0,5мл р-ра белка (10-100 мкг) с детергентом, смешивают с 0,5 мл 1 н NaOH и 3 мл рабочего раствора (р-в биуретовый). После 10-минутного выдерживания при комнатной температуре к полученной смеси добавляют 3 мл изоамилового спирта и тщательно перемешивают. Смесь центрифугируют 10 мин при 2000 g . Верхний слой изоамилового спирта осторожно удаляют с помощью шприца. Оставшийся раствор (4 мл) помещают в чистую пробирку, прибавляют 0,38 мл р-ва Фолина-Чокальтеу и после тщательного перемешивания к смеси добавляют 2 мл хлороформа. Все тщательно перемешивают. Все тщательно перемешивают, центрифугируют опять в тех же условиях. Удаляют слой хлороформа. Окраска развивается в течение 30 минут, после чего меряют оптическую плотность раствора при 750 нм. При построении калибровки вытворяют то же и добавляют те же реактивы. Метод я не изобретал : Mather J.H., Tamplin C.B. A method for the determination of protein in the presense of Triton X-100// Anal.Biochem. 1979. Vol. 93,N1. P.139 |
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
15.01.2007 // 14:06:53
[Спасибо, попробуем. |
|
Капелька Пользователь Ранг: 4 |
21.10.2015 // 14:07:23
Подскажите пожалуйста! Вот приготовила реактивы для метода Лоури, но в реактиве В спустя 15-20 минут после смешивания выпадает белая муть в осадок, что то не так делаю или причина в каких-то реактивах? Реактив В готовлю как 0,5% сульфат меди в 1% тартрате калия-натрия |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 5 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
