| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
разделение нуклеотидов >>>
|
 |
| Автор | Тема: разделение нуклеотидов | |||||
|
Лара Пользователь Ранг: 1 |
 11.05.2004 // 14:51:35
Пытаюсь разделить адениновые нуклеотиды методом обращенно-фазной распределительной хроматографии(колонка "Дасфер С18") с добавлением в подвижную фазу (25мМ NaH2PO4, рН 5.0)октилсулфоната натрия (100 mg/l). Вся проблема заключается в том, что постоянно меняется время выхода пиков, и АТФ с АДФ почти не удается разделить. Мне, как начинающему хроматографисту, тяжело разобраться в проблеме. Жду ваших советов. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
 11.05.2004 // 15:00:52
Уважаемая Лара! Я эту АТФ уже прогрыз насквозь. У Вас неверно выбран ион-парный реагент. Вместо октилсульфоната нужен тетрабутиламмония (сульфат,бромид что найдете). рН - самое узкое место и Вы выбрали его почти правильно (желательно 5,2). Количество ацетонитрила нужно не более 19 %. Я советую то, что знаю, поскольку АТФ 1% раствор - был мой первый объект анализа в фармакологии и до сих пор мы его успешно контролируем. Набор всех составляющих зависит от субстанции и способа стерилизации. Если сырье биотехнологического происхождения а розлив АТФ асептический, то АДФ вы почти не увидите. Если же ГЛС стерилизовался то АДФ - вполне приличный пик. |
|||||
|
irina Пользователь Ранг: 3 |
12.05.2004 // 14:52:14
В качестве подвижной фазы используйте элюент, содержащий 0,2М однозамещенный фосфат, 0,025М тетрабутиламмоний бромид + 10% метанола. Длина волны - 254нм. Колонка С-18. АМФ, АДФ, АТФ делятся превосходно! Успехов! |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
12.05.2004 // 15:25:37
Редактировано 1 раз(а) Лара! Вам тут вполне все дельно посоветовали. Хочу добавить, что интересующие Вас вещества несколько по-разному реагируют на тип растворителя. Вид хроматограммы в метанольных и ацетонитрильных элюентах, мягко говоря, несколько различается. Если у Вас нет метанола, вместо 10% его используйте 6-8% изопропанола. Иногда неплохо работают и смеси ацетонитрила с изопропанолом. Главное - не бойтесь экспериментировать. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
12.05.2004 // 16:34:11
Та та не поймалли ф трефях половите ф черфях!  Сильным ион-парным реагентом надо ловить сильные противоионы. В Вашем случае это фосфат, а не основание. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
12.05.2004 // 16:43:52
Что значит сильный ион-парный реагент и чем он принципиально отличается от слабого? Фосфат - ион-парный реагент?  Сам дошел или кто сказал? Интересная гипотеза. И каков же, Костя, по твоему мнению, механизм его действия?Да и оснований там нет никаких.  Есть только довольно жесткий динамический модификатор (тетрабутиламмоний).
|
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
12.05.2004 // 19:08:33
???????? "Фосфат- противоион. При чем здесь ион-парный реагент? Я просто сказал, что надо применять тот тип ион-парного реагента, котый бы цеплял сильные противоионы, а не слабые. Сегодня день какой-то ссорообразный Спокойно, Леонид, спокойно, доживем до понедельника!
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 6 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
