| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Глюкурониды, метаболиты >>>
|
 |
| Автор | Тема: Глюкурониды, метаболиты | ||
|
серегаа Пользователь Ранг: 29 |
 04.07.2007 // 18:11:36
Здравствуйте! Меня интересует нету ли среди участников этого формуа коголибо кто занимается метаболитами различных аммонийных соединений...В частности, глюкуронидами оланзапина, ламотргина, клозапина и т.д. Признаюсь, массу информации нашел в статьях но проблема в их изоляции после проведения реакции...Да и вообще есть несколько непонятных вопросов...как например, в некоторых источниках пишется что для разделения и определения использовали HPLC и цианоколонну...я такого никогда не делал...у меня есть эта техника, но есть только обычная колонка с силикагелью С18 без дополнительных групп...Интересно, нельзя это с помощью моей колокни сделать? и мне не очень понятно если честно зачем они пользуются нким иттрием для определения....Значит ли это что обычным УФдетектором я не смогу увидеть некий глюкуронид олансапина например?...вот такие у меня вопросы...надеюсь здесь есть у кого есть опыт работы с синтезом и определением такого рода соединений... Я мог ы помочь с литературой...например.. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Шуша Пользователь Ранг: 2736 |
04.07.2007 // 21:11:34
Редактировано 2 раз(а) Пользователь удалил свое сообщение |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
05.07.2007 // 4:41:40
А Вы с какого такого "понту" силикагель силикогелем назвали? Что же касается заданного вопроса, то он поставлен слишком общо. И ответ на него тоже будет общий - да, есть опыт анализа. Но я УФ детектированием не занимаюсь, а только ВЭЖХ-МС. Что же касается колонок и всего прочего, то я привык работать с конкретной задачей - такое-то вещество, такие-то метаболиты, в таких-то концентрациях, в такой-то матрице. Иначе это все пустая болтовня. |
||
|
Jenja Пользователь Ранг: 189 |
05.07.2007 // 10:26:41
Иттрий? Вы, случайно, не о радиодетекции меченых изотопами метаболитов говорите? Может, просто купите нужную колонку с привитыми цианогруппами и воспроизведите методики, указанные в найденных Вами источниках, при этом пользуясь УФ-детекцией? А если и колонку не можете купить, воспользуйтесь С18. Про разделение метаболитов оланзапина на С18 с УФ детектированием должны быть статьи. |
||
|
Шуша Пользователь Ранг: 2736 |
05.07.2007 // 11:46:52
Действительно ошибочка вышла. Виноват, постараюсь быть внимательней. Кстати, а почему на самом деле "а", ведь это сложное слово - должна быть соединтительная "о". |
||
|
серегаа Пользователь Ранг: 29 |
05.07.2007 // 12:05:32
Что же касается заданного вопроса, то он поставлен слишком общо. И ответ на него тоже будет общий - да, есть опыт анализа. Но я УФ детектированием не занимаюсь, а только ВЭЖХ-МС. Что же касается колонок и всего прочего, то я привык работать с конкретной задачей - такое-то вещество, такие-то метаболиты, в таких-то концентрациях, в такой-то матрице. Иначе это все пустая болтовня. Ух, я так и знал,что здесь будут специалисты....Спасибо ВАм за ответ.... Согласен...слишком общный вопрос конечно же получился...но признаюсь это и в моем свете тоже всетаки выглядит больше также..Я сейчас попробую даже привести методику которую я хотел бы воспроизвести. передо мной стоит задача синтеза глюкуронида оланзапина....пока для того чтоб набить руку таким образом чтоб я этот свой опыт мог направить на глюкурониды других аналогиччных препаратов. Нашел несколько методик...и попробую привести их здесь или их ссылки для конкретики. Что касается техники, что у меня есть, так это Агилент 1100 с обычным детектором, есть возможность для снятия ЯМР.спектров и скорее всего будет возможность для МS... "...OLZ 10-N-glucuronide (10-N-glucuronide) was synthesized as follows. To a silylated amber vial, 100 mg (0.32 mmol) of OLZ and 4 ml of acetone were added, and the vial was vortexed until the OLZ dissolved completely. A solution of glucuronic acid (124 mg, 0.64 mmol) in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.2) (4 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 days. Mixtures from several parallel reactions were combined, and the pH of the resulting mixture was adjusted to ;10 with 25% ammonium hydroxide solution. The solution was extracted with ethyl acetate (100 ml), and the organic layer that contained unreacted OLZ was discarded. The aqueous layer was lyophilized to dryness, and the residue dissolved in water. Aliquots (200 ml) of the aqueous fraction were separated on an analytical Inertsil C18 HPLC column. The initial mobile phase was 0.05 M ammonium acetate/acetonitrile (90:10), and a linear gradient of 2.5% acetonitrile/min was started 2 min after injection and continued for 20 min. Flow rate was maintained at 1.0 ml/min. The column effluent was collected at the retention volumes of two closely eluting peaks that corresponded to the two “isomers” of the 10-N-glucuronide. Isolated material was further purified by fractionation on the same HPLC system using isocratic elution (0.05 M ammonium acetate/acetonitrile, 77:23). Purified material was analyzed by proton NMR and electrospray MS. .....Metabolite Identification. HPLC. The HPLC system consisted of a Beckman model 126 pump, NEC PC8300 controller, Waters model 712 WISP autosampler, Applied Biosystem model 785A UV detector, and a Berthold model LB 507A radiodetector equipped with a 150-ml yttrium solid cell. For profiling plasma metabolites, samples were analyzed on an Inertsil C18 column (5 mm particle size, 0.46 3 25 cm) using a gradient of 0.05 M ammonium acetate and acetonitrile...." DISPOSITION AND BIOTRANSFORMATION OF THE ANTIPSYCHOTIC AGENT OLANZAPINE IN HUMANS (DRUG METABOLISM AND DISPOSITION Vol. 25, No. 1)... Вот здесь у меня как раз таки и возникают вопросы о возможности определения и разделения получаемых продуктов при обычном УФ на обычной силикагелевой колонке С18....Уверен, что колонку с привитыми цианогруппами в ближайшее время мы не приобретем...Честно говоря, я вообще предполагал, что я их смогу разделить на обычной стеклянной клонке набитой силикгелю  Затем еще одна штука...Тут нашел методу, правда не с лоанзапином, а с котинином...в случае с ламотригином метода почти та же...Постараюсь ВАм ее привести: "...N-(2,3,4-Tri-O-acetyl-6-methyl-~-~-glucopyranuronosy1)-( S)-(-)-contininium Bromide (4). A mixture of (S)- (-)-cotinhe (28) (0.176 g, 1.0 mmol) and 3 (2.38 g, 6 mmol) was heated at 60 "C under Nz for 3 days. The resulting melt was cooled to room temperature and the viscous mass partitioned between water (10 mL) and diethyl ether (5 X 20 mL). The ether extracts containing unreacted 3 and its degradation products were discarded, and the aqueous layer was eluted through an XAD-4 column (3 X 8 cm) followed by elution with 2 bed volumes of distilled water. Lyophilization of the combined aqueous eluate at high vacuum afforded 4 as an amorphous glass that was homogeneous by TLC (system a, R, 0.21) (430 mg, 75% yield): 'H-NMR (DMSO-d6) 6 9.45-9.32 (2 H, m, pyridinium H-2 and H-6), 8.84-8.80 (1 H, d, pyridinium H-4), 8.40-8.30 (1 H, t, pyridinium H-5), 6.40 (1 H, d, H-l"), 5.80-5.70 (2 H, m, H-2" and H-5'),5.58-5.48 (1 H, t, H-4"),4.83-4.95 (3 H, m, H-3", H-4', and H, m, H-3'a, H-3'b, and H-4'b), 2.12-2.20 (1 H, m, H-4'a), 1.8, 1.9,2.1 (9 H, 3 x s,3 X OCOCH,); FAB-MS (positive mode) m/z 493 (M - Br)+, 365 [M + H - Br - (3 X COCHd]', 317 (C1p,H1,0g)+, HI+, 127 (155 - CO)+, 115, 106, 98, and 93. (c)N -8-D-Glucopyranuronosyl-(5)-(-)-cotininiuImn ner Salt (5). Compound 4 (200 mg, 0.35 mmol) was dissolved in 1 M NaOH (1.0 mL), and the solution was left at ambient temperature for 16 h. Sample pH was adjusted to 7.0 with dilute aqueous acetic acid, and the mixture was applied to a column containing strong cation-exchange resin (Dowex 50X 1,50-100 mesh, 7 X 12 cm). The column was eluted with 4 bed volumes of distilled water, followed by 2 M aqueous ammonia solution. The first UV-absorbing basic fractions were collected and lyophilized under high vacuum to afford 5 as a light brown amorphow solid (98 mg, 80% yield), homogeneous by TLC (solvent system b, R, 0.38). The product was recrystallized from methanol/water to afford a white solid..."(Chem. Res. Toxicol. 1992,5, 280-285. Characterization of the Glucuronide Conjugate of Cotinlne: A Previously Unidentified Major Metabolite of Nicotine in Smokers’ Urine)... Здесь меня смущает прежде всего XAD.4 Никогда с таким не встречался если честно...насколько проверил, это некий нейтральный полимерный сорбент или еще чтото что используется при разделении или очистке от ароматики...В чем его необходимость в этой методе? И как бы мне его обойти учитывая, что его приобрести я тоже не смогу? В некоторых других методиках, где изучали аналогичные глюкурониды, также использовали ХАД.... Ну, думаю я тут намного конкретнее написал и надеюсь что это очень простая проблема передо мной стоит. Прошу заранее извинить меня если я изложил и выразил чтото неправильно, но буду рад Вашим замечаниям.....и пожеланиям... |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
серегаа Пользователь Ранг: 29 |
05.07.2007 // 12:08:48
Скорее всего, да...точно...меченые изотопы..НО у меня нет возможност для этого...Хотелось бы узнать о возможности их определения и разделения обычными путями....
|
||
|
Jenja Пользователь Ранг: 189 |
05.07.2007 // 12:23:06
Видимо потому, что относится не просто к кремнию (силико), а к кремнезему (силика). Окончание "а", вроде, означает отношение к земле (Alumina, Cadmia ...) |
||
|
Jenja Пользователь Ранг: 189 |
05.07.2007 // 12:29:15
Так тут ведь и написано УФ детектор, и С18, что Вас смущает? |
||
|
серегаа Пользователь Ранг: 29 |
05.07.2007 // 12:44:41
Редактировано 1 раз(а) [ |
||
|
серегаа Пользователь Ранг: 29 |
05.07.2007 // 12:48:32
точно в других источниках указана именно колонка с привитыми цианогруппами...вот же ступор то, а ...главное никак найти теперь эту страницу не мгу..причем даже в этой же публикации это тоже было указано....кстати, а моежт это только в случае измерения в плазме и т.д. вот тут например ....." The level of each metabolite in plasma, urine, and fecal extracts was estimated by injecting an aliquot of an extract into the column, collecting the peak of interest as it eluted from the column, and measuring the amount of radioactivity in the sample by liquid scintillation spectroscopy. Total radioactivity in the injected sample was estimated by passing an aliquot through the HPLC autoinjector and collecting the whole sample before the sample passed through the column. Scintisol (15 ml) was added to each sample and the level of radioactivity determined. For HPLC separation of urinary and fecal components, aliquots (150 ml) of the ethyl acetate or aqueous urine extracts and fecal extracts were injected onto a Hypersil C18 column (5 mm particle size, 0.46 3 25 cm), with an initial mobile phase of 0.1 M ammonium acetate/1% TEA in acetonitrile (9:1)...." А может такое быть что тут необходимо использовать такую клонку? |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
