Форумы ANCHEM.RU: Метод для определения микроколичеств общего жира

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Метод для определения микроколичеств общего жира >>>

  Ответов в этой теме: 16
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

lea53
Пользователь
Ранг: 8

20.08.2007 // 23:14:48

да, действительно.

Massapina C, Joaquim S, Matias D, Devauchelle N (1999) Oocyte and embryo quality in Crassostrea gigas (Portuguese strain) during a spawning period in Algarve, South Portugal. Aquatic Living Resources 12: 327-333.
…Total lipids were analysed according to Marsh and Weinstein [20] using tripalmitine as a standard. Samples (50 uL) of chloroform containing lipid extracted from the oocytes were dried for 20 min at 37 °C. Then, 500 íL of H2SO4 were added, the samples shaken and heated for 15 min at 200 °C and 1.5 mL of water were added before the absorbance was determined at 375 nm.

Hentschel BT, Emlet RB (2000) Metamorphosis of barnacle nauplii: Effects of food variability and a comparison with amphibian models. Ecology 81: 3495-3508.
…The protocol involves a chloroform: methanol extraction, charring precipitated lipid with sulfuric acid, and, measuring the absorbance of samples at 375 nm on a spectrophotometer (DU-70, Beckman-Coulter, Fullerton, California, USA). Absorbance values of the 18 samples (three independent replicates of each culture) were converted to units of micrograms of lipid based on a standard curve derived from tripalmitin (Sigma) concentrations ranging from 0 to 150 ~glsample(n = 18; r2 = 0.996).

Verslycke T, Roast SD, Widdows J, Jones MB, Janssen CR (2004) Cellular energy allocation and scope for growth in the estuarine mysid Neomysis integer (Crustacea: Mysidacea) following chlorpyrifos exposure: a method comparison. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology 306: 1-16.
…Total lipids were extracted according to Bligh and Dyer (1959) and total lipid content was determined by measuring the absorbance at 370 nm with tripalmitin as a standard.

De Coen WM, Janssen CR (1997) The use of biomarkers in Daphnia magna toxicity testing. IV. Cellular Energy Allocation: a new methodology to assess the energy budget of toxicant-stressed Daphnia populations. Journal of Aquatic Ecosystem Stress and Recovery 6: 43-55.
…Total lipids were extracted following Bligh and Dyer (1959). Daphnids were homogenised in 450 ul distilled water after which 500 ul chloroform (spectrofotometric grade) and 500 ul methanol (spectrofotometric grade) were added. After centrifugation the top phase was removed and 500 _l H2SO4 were added to 100 ul lipid extract and charred for 15 min at 200 _C. The total lipid content was determined by measuring the absorbance at 370 nm using tripalmitin as a standard.

.......................и т.д. и т.п.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Дима
Пользователь
Ранг: 192

21.08.2007 // 0:24:35

lea53 пишет:
да, действительно.

Ага. Вы обратили внимание, что сначала ребята делают экстракцию общих липидов разнообразными способами (догадайтесь почему

), а уже потом липиды отделенные от других "деталей" зажигают или прокрашивают. Вы сможете количественно отъэкстрагировать микрограмм "животной биомассы"?

Вот именно это - главный шаг, разделить липиды от нелипидов. Потом опредлять уже липиды можно хоть по ЯМР, хоть масс-спектроскопически, хоть флуоресцентно и т.п.

lea53
Пользователь
Ранг: 8

21.08.2007 // 0:35:42

так об этом и был вопрос - объемы для эстракции и соотношение с массой экстрагируемого вещества.

Дима
Пользователь
Ранг: 192

21.08.2007 // 0:57:13

lea53 пишет:
так об этом и был вопрос - объемы для эстракции и соотношение с массой экстрагируемого вещества.

Тут так не получится - на микрограммовом уровне уже работают другими методами ибо надежно взвесить образец уже весьма затруднительно в обычных лабораторных условиях (т.более биохимической) да и растворители такой чистоты вряд ли найдешь. Кроме этого, при нормальных объемах экстракта (сотни микролитров-миллилитр) не только липиды будут экстрагироваться, но и все остальное (ибо соотношение образца с объемом растворителя будет калоссальное). И если в нормальных условиях белок и олигосахариды и т.п. еще можно высадить или отделить другими способами - то на микрограммовом уровне обычная техника уже не работает.

Дима
Пользователь
Ранг: 192

21.08.2007 // 1:04:20

lea53 пишет:

De Coen WM, Janssen CR (1997) The use of biomarkers in Daphnia magna toxicity testing. IV. Cellular Energy Allocation: a new methodology to assess the energy budget of toxicant-stressed Daphnia populations. Journal of Aquatic Ecosystem Stress and Recovery 6: 43-55.
…Total lipids were extracted following Bligh and Dyer (1959). Daphnids were homogenised in 450 ul distilled water after which 500 ul chloroform (spectrofotometric grade) and 500 ul methanol (spectrofotometric grade) were added. After centrifugation the top phase was removed and 500 _l H2SO4 were added to 100 ul lipid extract and charred for 15 min at 200 _C. The total lipid content was determined by measuring the absorbance at 370 nm using tripalmitin as a standard.

Да, кстати, а почему бы вам не повторить эту методику? Как я понял, люди делают - и ничем особым не заморачиваются. Цена такого определения - ломаный грош, однако если в слегоньца левых журналах подобный результат принимают - почему бы и нет-то?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Изотермический титрационный калориметр TA Instruments NanoITC
Cоздан специально для изучения связывания и кинетики взаимодействия очищенных биологических образцов с ограниченной доступностью. С использованием данного прибора можно измерять тепловые эффекты в 100 наноджоулей используя в эксперименте менее 1 наномоля биополимера.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

lea53
Пользователь
Ранг: 8

21.08.2007 // 1:27:19

да пробовали - результаты не нравятся...


Ответов в этой теме: 16 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты