| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
деактивированная ВЭЖХ колонка >>>
|
 |
| Автор | Тема: деактивированная ВЭЖХ колонка | ||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
 23.10.2007 // 17:49:59
Уважаемые Коллеги! У нас есть ВЭЖХ колонка LC-18-DB, с деактивированной поверхностью сорбента. Что это означает? Есть ли какие-нибудь ограничения по составу п.ф., например ПАВ? Вопрос возник потому, что поработав на ней в течении дня, эффективность определения резко упала, пики выходят не гауссовой формы, а с плато на верхушке!! Буду очень благодарна за ответы! P.S. отдельный вопрос по использованию фосфатных буферов в составе п.ф., могут ли они как-то изменять свойства колонки?! |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
24.10.2007 // 10:18:03
Колонка LC-18-DB обозначает, что она Base deactivated, т.е поверхность несколько модифицирована под специфичное разделение веществ основного характера, пики которых на обычных колонках имеют повышенную "хвостатость". Никаких особых ограничений эти колонки не имеют. Просто вещества, органические основания (амины, триазины, имиды и др.) имеют гораздо более симметричные пики. Проблемы с пиками, которые Вы описали - результат перегруза колонки и никоим образом не связаны с химией поверхности сорбента. Скорее всего колонка была плохо откондиционирована, а к концу дня наконец-то произошло нормальное уравновешивание колонки ПФ да и еще эффект насыщения аналитом. Вот и возник перегруз колонки по данному (целевому) аналиту. Почти всегда плато на верхушке пиков говорит о большой массе введенного аналита. Разбавьте исходный раствор либо уменьшите объемную нагрузку на колонку, т.е вместо 20-25 мкл, которые Вы дозируете введите 5-10 мкл. |
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
24.10.2007 // 11:15:51
Проблем с перегрузкой колонки никогда раньше не было, до этого работали на обычной С18, хоть и вводим петлю 100 мкл, но исх.конц. вводимого вещества не больше 10 мкг/л. А если вдруг в колонку попадает пузырек воздуха? как это отражается? |
||
|
Олег Пользователь Ранг: 529 |
24.10.2007 // 11:41:34
Попробуйте заколоть элюент вместо пробы. Если появятся пики - значит в колонке что-то осталось. А может быть и элюент что-то содержит. Тогда просто чистый растворитель или просто прогоните анализ без ввода пробы. |
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
24.10.2007 // 13:48:19
многое из этого мы уже пробовали. понятно, что что-то садится на колонку. после промывки колонки ацетонитрилом 70% с течением короткого времени снова наблюдается изменение свойств колонки. Поэтому я и интересуюсь, может быть не рекомендуется использовать в составе п.ф. например додецилсульфат натрия (может быть надо использовать другие ион-парные реагенты?) или фосфаты (слышала, что у многих возникают с ними проблемы). |
||
|
Олег Пользователь Ранг: 529 |
24.10.2007 // 14:30:41
Уважаемая, Алла! А Вы пробовали после промывки пару раз прогнать просто элюент в режиме анализа или заколоть читый элюент, р-ль? Тогда сможете предположитьоткуда загрязнения. А вообще Г. Барам давал дельные советы по этому поводу на форуме. Поищите. Сейчас не могу найти ссылку. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
25.10.2007 // 11:21:24
Уважаемый Олег Ермолаевич, спасибо за советы. Все это мы пробовали. речь идет не о загрязнениях и примесях, содержащихся в фазе и пробе, а о нежелательном использовании некоторых компонентов в составе п.ф. Мы нашли информацию в литературе, что додецилсульфат натрия не рекомендуется использовать в п.ф., он приводит к уширению пиков и плохой воспроизводимости. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
25.10.2007 // 12:55:28
Не стоит валить все в одну кучу... Мухи - отдельно, котлеты - отдельно. Если фосфаты добавляют, чтобы стабилизировать рН элюента за счет формирования буферных систем, то додецилсульфат натрия - это типичный ион-парный динамический модификатор. И, если с фосфатами, после некоторого периода работы, колонку можно отмыть и работать на бессолевых элюентах без изменения ее первоначальных хроматографических свойств, то додецилсульфат переводит разделение на колонке в ион-парный режим, а полностью отмыть от него колонку просто нереально. Все равно остаточные ионообменные свойства будут ощутимо проявляться. Да, ион парный режим не отличается воспроизводимостью удерживания и хорошей формой пиков. Но если в обычном ОФ режиме полярные вещества просто не удерживаются, то до недавнего времени это был, можно сказать, единственный вариант добиться приемлемого удерживания и разделения полярных ионогенных веществ, не прибегая к ионообменным сорбентам. Тут уж было не до жиру... В настоящее время для решения аналогичных задач вместо ион-парного режима с ПАВ все более часто применяются методы гидрофильной хроматографии (HILIC), что связано большей частью со все более широким внедрением в практику ВЭЖХ масс-спектрометрических детекторов, где применение ПАВ в составе элюента нежелательно, а то и вовсе невозможно. Эти и схожие аспекты ВЭЖХ подробно обсуждались в форуме мной, Islanderом и КонстантиномС. Если воспользуетесь поиском, то найдете много тем, где эти вопросы достаточно подробно обсуждаются |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
