Форумы ANCHEM.RU: SDS и обращенная фаза

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

SDS и обращенная фаза >>>

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: SDS и обращенная фаза

optima
Пользователь
Ранг: 322

13.12.2007 // 16:30:29

Почему-то засело в голове, что SDS сложно вымыть с обратно-фазных колонок. Но никаких ссылок найти не могу.
Подскажите, если в образце SDS, не вредно ли это для колонки?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Farma
Пользователь
Ранг: 382

13.12.2007 // 18:27:32

optima пишет:
Почему-то засело в голове, что SDS сложно вымыть с обратно-фазных колонок. Но никаких ссылок найти не могу.
Подскажите, если в образце SDS, не вредно ли это для колонки?

Приятного мало, но вымыть можно стандартной комбинацией органических растворителей для регенерации: 100% ацетонитрил как самый слабый и гексан (дихлорметан, гептан и т.д.) как наиболее сильный из возможных вариантов. Не забудьте буфер вымыть из системы. А вообще - пользуйтесь предколонками, это надёжнее.

Vasya
Пользователь
Ранг: 129

13.12.2007 // 19:03:53

Farma пишет:
Приятного мало, но вымыть можно стандартной комбинацией органических растворителей для регенерации: 100% ацетонитрил как самый слабый и гексан (дихлорметан, гептан и т.д.) как наиболее сильный из возможных вариантов. Не забудьте буфер вымыть из системы. А вообще - пользуйтесь предколонками, это надёжнее.

Ну, во-первых, не надо забывать, что ацетонитрил не смешивается с гексаном(гептаном), а значит не стоит сразу переходить от одного к другому. Во-вторых, не советую ОФ-колонку мыть предельными углеводородами (гексан, гептан). Предлагаю останавливаться на хлороформе (дихлорметане), но лучше в смеси с метанолом 1:1. Предколонки - это действительно хорошо.

STELS
Пользователь
Ранг: 15

13.12.2007 // 20:50:40

И вообще перед тем как промывать колонку более сильной органикой, чем 100% ацетонитрил (в ОФ варианте) нужно посмотреть совместимость компонентов системы (колонка-бывает из PEEK, который вздувается от ТГФ, а также боится хлор содержащих растворителей, капиляры и т.д), так что если не печет я думаю лучше не спешить.

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

18.12.2007 // 9:45:41

SDS количественно удаляется из колонки 100% метанолом или 95% этанолом. Достаточно пропустить через колонку объем растворителя, равный 10 объемам колонки. Насчет ацетонитрила - не знаю.

Волгин
VIP Member
Ранг: 1327

18.12.2007 // 13:01:56

G.Baram пишет:
SDS количественно удаляется из колонки 100% метанолом или 95% этанолом. Достаточно пропустить через колонку объем растворителя, равный 10 объемам колонки. Насчет ацетонитрила - не знаю.

Количественно, или на 99,9% ? У Вас есть доказательства?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Микроскоп монокулярный UV-1280M
Микроскоп предназначен для исследования препаратов в проходящем свете и светлом поле. Научные области: Медицина, гематология, урология, дерматология, биология и др. Увеличение: 40х-1000х. Объективы: Ахроматические, 4х, 10х, 40х и 100х МИ

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Farma
Пользователь
Ранг: 382

18.12.2007 // 13:49:24

Vasya пишет:

Farma пишет:
Приятного мало, но вымыть можно стандартной комбинацией органических растворителей для регенерации: 100% ацетонитрил как самый слабый и гексан (дихлорметан, гептан и т.д.) как наиболее сильный из возможных вариантов. Не забудьте буфер вымыть из системы. А вообще - пользуйтесь предколонками, это надёжнее.
Ну, во-первых, не надо забывать, что ацетонитрил не смешивается с гексаном(гептаном), а значит не стоит сразу переходить от одного к другому. Во-вторых, не советую ОФ-колонку мыть предельными углеводородами (гексан, гептан). Предлагаю останавливаться на хлороформе (дихлорметане), но лучше в смеси с метанолом 1:1. Предколонки - это действительно хорошо.

Я совсем не имел в виду использовать смесь ацетонитрила с гексаном. Я лишь рекомедовал ацетонитрил как мягкий вариант регенерации, а гексан - как экстремальный.

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

18.12.2007 // 14:01:09

Редактировано 1 раз(а)

На счет количественности сомневаюсь. По пептидам потеря разрешения (кривые пики) будет сказываться и после отмывки какое то время. Вообще (собственный горький опыт) лучше с детергентами на обр. фазу не лазить, или использовать какой-то off-column clean-up, если количества материала позволяют, а уж с элюатом (разбавленным или высушенным и перерастворенным) идти на аналитическую колонку.

optima
Пользователь
Ранг: 322

18.12.2007 // 14:32:23

По пептидам потеря разрешения

Спасибо за предупреждение. Актуально.
"off-column clean-up" - это что?

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

19.12.2007 // 3:09:44

Можно на к-л (их много в продаже) одноразовом картридже почистить, так чтобы SDS в основном остался, а пептиды элюировать одной фракцией, которую собрать, сушить (или разбавлять) и анализировать на аналитической колонке.

Лично мой опыт - не связывайтесь вы с этим делом, если только уж совсем без этого обойтись невозможно. Из 0.1% SDS, особенно если материала пара пикомолей, протеинам одна дорога - в гель. Там их и щепить надо, и работать с чистым экстрактом пептидов. Есть методы как SDS убирать (вплоть до прямо на MALDI мишени) - если надо, могу найти ссылки, но в моих руках все это не сработало, да и массово народ это не пользует.

AA_Alex
Пользователь
Ранг: 372

20.12.2007 // 8:40:48

Редактировано 1 раз(а)

Если я правильно понял, имеется в виду 0.1% SDS в образце.
А ситуация, когда он используется в качестве ион-парной добавки в элюент? Как тогда правильно отмывать колонку поле него?
А гептилсульфонат натрия (порядка 200-400 мг/л), лучше, чем SDS вымывается с колонки?


Ответов в этой теме: 12 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты