| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ анализ производного ГАМК - фенибута >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ анализ производного ГАМК - фенибута | |||||
|
Мэриэн Пользователь Ранг: 5 |
 07.02.2008 // 16:01:07
Редактировано 1 раз(а) Уважаемые коллеги, помогите, пожалуйста, советом. Нам необходимо изучить фармакокинетику фенибута - производного гамма-аминомасляной кислоты на крысах. Мы столкнулись с проблемой его слабого удерживания на фазе С18. Мы работали на 0,05 м однозамещенном фосфатном буфере с различным процентом ацетонитрила, определение - УФ детектором. Сначала pH буфера сделали 4,4 и после прокола 10-15 биопроб пик ""уехал" на 2-3 минуту. Затем мы добавили к буферу ион-парный реагент - гептансульфонат натрия (0,12%) и подкислили буфер до pH 2,7 и при содержании ацетонитрила 20% нам удалось на 14-15 минуте получить пик хорошей высоты. Затем вещество хорошо удерживалось на колонке в течении 200 проб. Время удерживания уменьшилось только на минуту. А сегодня я вкалываю фенибут в плазме практически при том же давлении 6-6,2 МПа и получаю пик на 3 минуте, практически под биологией.  Подскажите, что делать? Увеличить концентрацию гептансульфоната? Еще сильнее закислить буфер? колонок других у нас нет - только обращенка. Заранее спасибо. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Илья226 Пользователь Ранг: 354 |
08.02.2008 // 7:44:57
А над дериватизацией не думали?....у него к тому же и спектра характерного нет...при 210 только детектируется. |
|||||
|
Илья226 Пользователь Ранг: 354 |
08.02.2008 // 7:46:34
Редактировано 1 раз(а) |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
08.02.2008 // 10:32:57
Редактировано 1 раз(а) А с элюентом все в норме, изменения состава не происходит? Вы случаем в мицеллярный режим "не залезли"? Или в "пограничный"? Другой вариант: происходит сорбция каких-либо компонентов матрицы, которые не элюируется рабочим элюентом, это приводит к изменению удерживания вашего аналита (т.к. изменяются физико-хим. св-ва сорбента). Надо обратить внимание на матрицу, предколонку, проверьте после соответсвующей "промывки" ситуация изменяется или нет. Еще здесь надо обратить внимание на сорбент, могут менятся его физико-хим. свойства, не ввиду сорбции компонентов матрицы, а ввиду его "лабильности" в данных условиях (рН элюента, состава элюента, время контакта рабочего элюента и сорбента и др.), здесь уже надо менять условия. |
|||||
|
Мэриэн Пользователь Ранг: 5 |
08.02.2008 // 12:25:37
Над дериватизацией уже, конечно, думали. К сожалению, у нас довольно жесткие временные рамки для выполнения работы, поэтому нет возможности перебирать варианты. Если у вас какие-то конкретные предложения по дериватизации, будем благодарны за предложение. |
|||||
|
Мэриэн Пользователь Ранг: 5 |
08.02.2008 // 12:28:29
Редактировано 1 раз(а) Мы в течение двух недель (100-150 биопроб) получаем стабильные результаты (время удерживания не меняется) при одинаковых условиях, давление вырастает на 1-2 МПа. Затем происходит внезапный "скачок" пика с 14-ой минуты на 3-4. Непонятно, почему такой резкий сдвиг при тех же самых условиях. Если Вы сталкивались с чем-то подобным, будем благодарны за совет. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Мэриэн Пользователь Ранг: 5 |
08.02.2008 // 12:28:30
Редактировано 2 раз(а) Мы в течение двух недель (100-150 биопроб) получаем стабильные результаты (время удерживания не меняется) при одинаковых условиях. Затем происходит внезапный "скачок" пика с 14-ой |
|||||
|
Мэриэн Пользователь Ранг: 5 |
08.02.2008 // 12:28:38
Мы в течение двух недель (100-150 биопроб) получаем стабильные результаты (время удерживания не меняется) при одинаковых условиях. Затем происходит внезапный "скачок" пика с 14-ой |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
08.02.2008 // 15:04:27
Попробуйте увеличить ионную силу буфера, например, до 0,1 М KH2PO4 рН =2,5 (я думаю будет достаточно), а в таких случаях как фенибут для получения более симметричных пиков иногда используют смесь ион-парных реагентов , например, (тетрабутил аммония гидросульфат и октилсульфонат натрия в соотношении 1:4). Варьировать удержание фенибута можно повышая ионную силу. |
|||||
|
Лидия VIP Member Ранг: 436 |
08.02.2008 // 18:43:00
Первое что приходит на ум- это ошибка при приготовлении элюента. Если эту возможность исключить, то можно посоветовать использовать в качестве буферной системы - формиатную. При данных значениях рН обеспечить буферную емкость будет легче. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
08.02.2008 // 23:23:10
Редактировано 1 раз(а) to Мэриэн: Если честно сталкивался только один раз в банальном ОФ-режиме, сорбент Кромасил С18, элюент вода ацетонитрил, "изократ", аналит - бенз(а)пирен, тогда абс. время удерживания уменьшилось "скачком"(причем в ходе работы, он-лайн, на 6-ой вкол, на одном и том же элюенте, и при всех остальных "условно" постоянных параметрах) где-то на 25-30%, причем до этого все "стояло" удовлетворительно, кстати говоря, ситуация так и не пришла в исходное состояние. Это не фантастика, иллюзорно адекватное объяснение этому есть, но тогда я не стал искать корни этого проишествия. На что обратить внимание я уже говорил, надо определить причину, а то может, потом будет то же самое. Адекватно "регенерируйте" сорбент! И потом поставьте рабочий элюент и уколитесь, если "чудеса" исчезнут, тогда понятно в каком направлении размышлять. И еще перед этим проверьте себя как следует! Нет ли где ошибки. Все бывает, отвлекся и вот тебе. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 10 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
