| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Аффинная ВЭЖХ протеиназ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Аффинная ВЭЖХ протеиназ |
|
Andrey Пользователь Ранг: 40 |
 04.03.2008 // 20:09:41
Добрый день, уважаемые коллеги! Подскажите, кто-нибудь таким занимался или направьте в нужное направление, пожалуйста. Встал вопрос о выборе сорбента и его характеристиках для возможности нанесения на колонку около 100 мг вещетсва белковой природы (в пересчете на чистое вещество). Сама проба представляет собой плазму крови. Предполагается аффинное выделение определенной фракции. Для этого необходимо посадить на сорбент (ковалентно) лизин или апротенин. Кто и где это может сделать? Думаем заказать пустые колонки у БиоРада, но вот кто будет их набивать, если удасться всё-таки сделать сорбент с привитой фазой... Прибор на базе DuoDlow от БиоРада, самая простая конфигурация. С уважением. |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
05.03.2008 // 10:37:27
Делается это при помощи бромциана. Не пугайтесь !!! 1. Берете сухую агарозу или сефарозу, даете хорошенько набухнуть в дистиллированной воде. 2. В двугорлую колбу приливаете раствор роданида аммония , присоединяете капельницу к одному отводку колбы, а к другому аллонж и колбочку через шлиф. Эту приемную колбу поместить на ледовую баню (лед+хлорид натрия). По каплям в двугорлую колбу добавляют бром. Двугорлую колбу можно слегка до 40 С подогревать. После добавления эквивалентного количества брома в приемной колбе при хорошем охлаждении ростут белоснежные кристаллы бромциана. 3. Агарозу промывают, отделяют воду и помещают фосфатный буфер рН-8. 4. К набухшей агарозе в фосфатном буфере добавляют полученный бромциан и перемешивают при охлаждении льдом в течение часа, проверяя рН, чтобы он не съехал меньше чем до 6,5. 5. К активированной таким образом агарозе добавляют лиганд ( апротенин, лизин или трипсин ...) и опять перемешивают , но уже часа 3. 6. Промывают агарозу на фильтре Шотта и помещают ф консервирующий буфер, если не предполагается ее дальнейшее немедленное использование. По правилам, нужно было бы еще проверить количество привитых лигандов на единицу объема агарозы. Я сделать это не могу поскольку обитаю в Хохляндии. 
|
|
Andrey Пользователь Ранг: 40 |
07.03.2008 // 12:17:46
Спасибо, Garry!! Будем пробовать! Я тут нашел готовые сорбенты от Amersham, не сталкивались? Вроде делают то же. |
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
11.03.2008 // 14:29:57
Редактировано 1 раз(а) Не-а, не сталкивался ибо занимался афинной хроматографией давно. Мы из кукурузного экстракта ингибитор трипсина извлекали, поэтому сами "варили" сорбент, пришивая трипсин в качестве лиганда. Если нашли фирменный афинный сорбент, то конечно лучше воспользоваться готовым. Да, если я не ошибаюсь, то у Дэвэни и Гергея "Аминокислоты, пептиды, белки" имеется подробное описание процесса пришивки лигандов к агарозным гелям. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 3 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
