Форумы ANCHEM.RU: Гель-фильтрация

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Гель-фильтрация >>>

Ответов в этой теме: 8

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Гель-фильтрация

Marnau
Пользователь
Ранг: 2

11.09.2008 // 15:35:46

Здравсвуйте! Очень нужна помощь по такому вопросу: пытаюсь разделить пептиды, содержащиеся в экстракте плаценты; использую Ultrahydrogel column 250 (Waters). Не могу подобрать подвижную фазу??

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Farma
Пользователь
Ранг: 382

11.09.2008 // 15:48:06

Marnau пишет:
Здравсвуйте! Очень нужна помощь по такому вопросу: пытаюсь разделить пептиды, содержащиеся в экстракте плаценты; использую Ultrahydrogel column 250 (Waters). Не могу подобрать подвижную фазу??

Если речь идёт именно о пептидах, не совсем понимаю, почему Вы решили использовать именно ГФ механизм. Я бы остановился на широкопористом ОФ сорбенте. Также не ясно, что именно Вы собираетесь подбирать. Чистоту воды?

Dezh
Пользователь
Ранг: 157

11.09.2008 // 16:06:51

Поддержу Farma, кроме того, желательно в таких случаях указать примерный мол. вес объектов.

Marnau
Пользователь
Ранг: 2

11.09.2008 // 18:57:30

К сожалению, выбирать не приходится, имеется только такая колонка, а молекулярныая масса около 5 тыс дальтон. Т.к. для эксклюзионной хроматографии протеинов проблемой является устранение взаимодействия с колонкой, что достигается подбором состава подвижной фазы, чего я сделать и не могу. А я использовала фосфатный буфер с ацетонитрилом (90:10).

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

11.09.2008 // 19:27:24

2 Marnau:
Я одного не пойму:
1. Исходя из чего Вы решили, что хром. система неприемлима?
2. По каким параметрам Вы оцениваете адекватность "подбора элюента"?
3. Детектирование? На каком основании выбирался тип дететктирования.

З.Ы.:Чтобы минимизровать "побочные механизмы", нужно отталкиваться от физ.-хим. св-в сорбатов и сорбента. Понятно, что необходимы рекомендации производителя сорбента для данной ситуации, или опыт людей с данным сорбентом и с данным типом сорбатов. Конечно, есть еще вариант... пальцем в звездное небо.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

12.09.2008 // 10:40:23

Привожу рекоммендации фирмы Тойо Сода для полимерных колонок для гельфильтрации при разделении :

1. Амфотерных гидрофильных соединений ( пептиды, белки, поли и олигосахариды, ДНК и РНК) - водный буферный раствор или солевой раствор 0,1 М NaNO3 или 0,3 М Na2SO4)/

2. Амфотерные гидрофобные соединения (голубой декстран, коллаген, желатин, гидрофобные белки и пептиды) - 20 % ацетонитрил в 0,1 М NaNO3 или 35-45 % ацетонитрил в 0,1 ТФУ.
Но результат будет только в том случае, если только пептиды имеют существенную разницу в молекулярных массах и не попадают в зоны эксклюзии Вашей колонки. Т.е. более-менее линейный участок на S-калибровке должен с лихвой вмещать все предполагаемые массы. Если у Вас порядок масс около 5000 то колонка должна иметь соответственно диапазон разлеления 10^2 - 10^4 . Если колонка таким требованиям не удовлетворяет, то не парьтесь. Хороших результатов не получите.
Следует прислушаться к постам выше и использовать ОФ и стандартные в этих случаях подвижные фазы.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал Санитарно-эпидемиологический собеседник
На страницах журнала публикуются новые нормативные документы, специалисты отвечают на актуальные вопросы, с которыми так или иначе связана ваша деятельность, рассказывают обо всех изменениях в законодательстве, дают комментарии к новым документам (СанПиН, СП, МУК, МР).

Farma
Пользователь
Ранг: 382

12.09.2008 // 15:59:54

От себя добавлю, что неплохо бы конкретизировать свойства веществ, которые делите. Это именно пептиды или белки? Если пептиды, то какой примерно длины? А если они, как сказал ув. Garry, схожи по М.В. и в добавок в зону эксклюзии попадают, то я бы на Вашем месте не спешил рвать вторичные взаимодействия. Возможно, это единственный способ что-то удержать на данной колонке.

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

14.09.2008 // 10:14:50

Не надо ругаться. Вопросы правильные и (особенно если детекция была по UV) там ровных, красибых пиков вообще не должно быть: вы только представьте какой "компот" вы делите! Плюс к тому, вы довольно близко к низкомолекулярному пределу колонок и пепрекрываетесь с низкомолекулярной "грязью", которой там много и которая, в сумме, поглощает в UV зверски.

Если вы идете за какой то определенной активностью, имеет смысл просто влсепую собирать активную фракцию и дальше работать с RP. Нужно также попытаться свести баланс по активности ( loaded vs collected).

Апраксин
VIP Member
Ранг: 3288

01.02.2009 // 14:54:48

Редактировано 1 раз(а)

Пользователь удалил свое сообщение


Ответов в этой теме: 8	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты