| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
определение глутатиона >>>
|
 |
| Автор | Тема: определение глутатиона | ||
|
LVD Пользователь Ранг: 219 |
 19.12.2008 // 9:50:17
Редактировано 1 раз(а) Уважаемые коллеги! Может быть кто-нибудь занимался анализом окисленного, восстановленного глутатиона. Трипептид из цистеина, глутаминовой кислоты и глицина. Знаю, что красится либо нитропруссидом натрия (красный), либо фосфорновольфрамовой кислотой (синий), либо смесью ди-нитробензола с едким натром (желто-зеленый). М.б. где-то есть подробная методика, чтобы не изобретать велосипед. А если вместо спектрофотометра - СЕ с диодной матрицей? Но отдельно окисленный восстановленный надо вживую? Заранее благодарю. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
LVD Пользователь Ранг: 219 |
19.12.2008 // 9:52:41
Да, объект - растительная ткань. |
||
|
LVK Пользователь Ранг: 37 |
21.12.2008 // 21:45:03
Редактировано 1 раз(а) У Армстронга есть протокол ВЭЖХ для плазмы крови (ТФЭ без дериватизации, DAD 210 нм). Мыло напишите, я скину. Биохимики обычно определяют GSH с дитионитробензойной к-той (реагентом Эллмана), окраска желтая, макс 410 или 420 нм. GSSG, насколько я помню, восстанавливают до GSH. Но без разделения будут артефакты - цистеин и т.п. |
||
|
LVD Пользователь Ранг: 219 |
22.12.2008 // 4:23:02
Мыло laser{coбaчkа}sifibr.irk.ru. Спасибо большое. |
||
|
LVK Пользователь Ранг: 37 |
22.12.2008 // 11:42:50
Ушло, гл. 13 |
||
|
LVD Пользователь Ранг: 219 |
23.12.2008 // 10:38:42
Еще раз огромное спасибо. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
23.12.2008 // 11:37:33
Если не сложно, поделитесь и со мной этой статьей. Заранее благодарна. lalka-s{coбaчkа}mail.ru |
||
|
LVK Пользователь Ранг: 37 |
23.12.2008 // 22:02:25
Ушло тоже, вынимайте. |
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
24.12.2008 // 10:35:57
Огромное спасибо!!! |
||
|
LVD Пользователь Ранг: 219 |
18.11.2010 // 8:06:09
По протоколу Армстронга пытались делить на имеющейся чешской колонке окисленный и восстановленный глутатион. Не получилось, вернее получилось не очень, не до базовой. Решили, что из-за колонки, хотя, конечно, пробовали менять условия - pH элюэта, соотношение в нем органики и водного 0,05% ТФУ, пробовали и 0,1% ТФУ. Прибор - Шимадзу LC10, колонка была С18, 3*150, 100*5, Сепарон. Сейчас приобрели Кромасил, также С18, 25*4,6, 100, 5. Есть предколонка. Успехов не достигли. При скорости элюента, указанной в протоколе 1 мл/мин, почти совсем не делится (10% высоты), подобрали такие условия - колонка указана выше, скорость элюента 0,5 мл/мин, элюент метанол:0,05%ТФУ 50:50, петля 5 мкл, пробовали 20, чуть хуже, 100 мкл из протокола, много хуже. Да, ввод ручной. Детектор УФ (190-340 нм, т.е. не покрасишь). Длина волны 210 нм. Температура колонки 30 градусов. Концентрация стандартов по 0,5-0,25 мкг/мл. Стандарты всегда свежие, смешиваем перед вколом. Разведены элюентом. Пробовали градиент : уменьшали органику, увеличивали, с разной скоростью. Делятся плохо, хуже, чем в изократе. Градиент в нашем приборе низкого давления.Наверное, есть смысл попробовать какой-нибудь фосфатный буфер? Может быть кто-нибудь сталкивался с подобной задачей? Были бы очень благодарны за совет. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
18.11.2010 // 18:52:14
Редактировано 3 раз(а) GSH, GSSG и плюс еще 2 пептида "сверху" делил в HILIC mode на обычном силикагеле. Детектировал правда - MS/MS (MRM mode). Может проще предкол. дериватизацию для УФ-ВИД сделать, чем "париться" с 210нм? Да и хром. поведение изменится. Разделить данную пару на Sil C18, конечно, проще, используя градиент. Темп. сделайте комнатную. Замените метанол на ацетонитрил, или сделайте микс. Вместо ТФУ (0,025-0,05%об.) можно взять фосфатный буфер (25-50мМ), фосфатный буфер + ТЕА, LiClO4 и т.д. Да и делайте все "правильно". |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
