Форумы ANCHEM.RU: Проблема с временем удерживания

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Проблема с временем удерживания >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Проблема с временем удерживания

igor.cv
Пользователь
Ранг: 14

22.07.2009 // 10:53:47

Здравствуйте!
Занимаюсь определением содержания полисахаридов в образцах.
Для начала условия хроматографирования:
- колонка Supelcosil LC-NH2
- подвижная фаза вода:ацетонитрил=25:75
- Образцы растворены в смеси вода:ацетонитрил=65:35
- стандарты полисахаридов растворены в смеси вода:ацетонитрил=65:35.
- в анализе используется рефрактометрический детектор, стабилизированный при 35 градусах Цельсия.

Стандартные вещества следующие (в порядке увеличения времени удерживания): фруктоза, глюкоза, сахароза, мальтоза, лактоза.
Поскольку проведение анализа достаточно длительный процесс, то изначально на колонку подавался раствор сахарозы, затем - мальтозы, и потом - лактозы. На второй день хроматографировали растворы фруктозы и глюкозы, а затем - реальные образцы.
В первый день стабильность времен удерживания стандартных веществ была отменной!!! На второй же день начались непонятки. Стандарт фруктозы обещал беспроблемное проведение анализа, но вот после подачи на колонку стандарта глюкозы базовая линия начала уходить вниз; дрейф за 14 минут анализа составил 10000 по шкале RID (ПО ChemStation). Дальше - больше. После подачи на колонку реального образца начал смещаться в сторону увеличения времени удерживания пик сахарозы (с каждой инжекцией примерно на 0.15 минуты (почти 10 секунд), причем время удерживания фруктозы существенно не изменялось.
В чем может быть причина смещения времени удерживания сахарозы в описанных мною условиях?
Если нужна дополнительная информация, с радостью предоставлю!

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

22.07.2009 // 18:41:17

Редактировано 1 раз(а)

Изменение удерживания сахарозы.
1. Изменение состава элюента.
2. Сорбция (в этих условиях может быть необратимая) компонентов матрицы => изменение ф.-х. свойств сорбента.
3. Изменение температуры колонки.
4. Кондиционирование сорбента проведено не до конца.

Причин дрейфа базовой линии много.
У Вас случай дрейфа базовой линии воспроизводится или это был одиночный случай? Если последнее, то забудьте.

Зачем Вы колите индивидуальные соединения по отдельности - сделайте смесь.

З.Ы.: Ваши сорбаты - не полисахариды!!!

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

22.07.2009 // 20:24:26

igor.cv пишет:
Занимаюсь определением содержания ...сахаридов в образцах....
Поскольку проведение анализа достаточно длительный процесс,...

Это что-то новое- длительный процесс.

С какой радости он длительный?
Выяснил порядок выхода? Сделай один образец для всех стандартов.
Дрейф рефрактометра- это состав элюента изменился. (Или колонку не термостатируете).
Как же ты с рефрактометром собрался полисахариды определять, а стандарты у тебя- моно- и дисахариды??

Какие полисахариды и в чем?

igor.cv
Пользователь
Ранг: 14

23.07.2009 // 10:48:30

virtu пишет:
Изменение удерживания сахарозы.
1. Изменение состава элюента.
2. Сорбция (в этих условиях может быть необратимая) компонентов матрицы => изменение ф.-х. свойств сорбента.
3. Изменение температуры колонки.
4. Кондиционирование сорбента проведено не до конца.

1. состав элюента не менялся - он постоянный
3.температура колонки стабильна (колебания +/- 0.1 градуса считаю несущественными)
4. кондиционирование сорбента я провожу каждый день перед анализом примерно час (при скорости потока 0,75 мл/мин; колонка 250 мм х 4.6 мм)

P.S. Вчера нашел течь на входе в колонку. Устранил ее. сейчас кондиционирую колонку, скоро буду видеть результаты.

igor.cv
Пользователь
Ранг: 14

23.07.2009 // 11:47:49

течь не устранила дрейфа базовой линии

. перед этим система была прокондиционирована; также была промыта рефернсная ячейка (reference cell). какие будут варианты?

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

23.07.2009 // 16:13:19

igor.cv пишет:
течь не устранила дрейфа базовой линии . перед этим система была прокондиционирована; также была промыта рефернсная ячейка (reference cell).

Никаких.

Если хочешь избавиться от дрейфа- замени рефрактометр на ДАД.
"Состав элюента не менялся"- у вас, простите, бутыль на 5 или 10 литров сразу?

Дрейфует детектор- замени колонку на гидроксилированный силикагель или (лучше) на С18 и проверь на том же элюенте. Сохранится дрейф?
Я на аминофазе устраивал нормальнофазовые градиенты при анализе инулина (95%-0% MeCN), но детектор, естественно, был ДАД. (Waters).

Рефрактометр не перевариваю с давних времен.

Какие образцы и что ты анализируешь? Это военная тайна? Как готовишь?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал прикладной спектроскопии
В журнале публикуются оригинальные статьи и краткие сообщения о результатах научных исследований, обзоры, хроника научной жизни, рецензии на новые книги и научно-техническая информация по прикладной спектроскопии и смежным вопросам.

igor.cv
Пользователь
Ранг: 14

24.07.2009 // 16:52:55

нашел я причину дрейфа - все дело в детекторе. теперь вот экспериментирую с ним - меняю скорости подачи ПФ (колонку снял), температуру детектора... эксперименты провожу с водой

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

24.07.2009 // 20:55:45

igor.cv пишет:
нашел я причину дрейфа - все дело в детекторе. теперь вот экспериментирую с ним

Тебе больше заняться нечем, кроме как экспериментить с детектором? Ты с ним ничего не сделаешь (хорошего).


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты