| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Методика определения фосфолипидов в желтке яйца >>>
|
 |
| Автор | Тема: Методика определения фосфолипидов в желтке яйца | ||
|
Евген Пользователь Ранг: 1 |
 30.11.2009 // 17:02:35
Уважаемые специалисты, обращаюсь с просьбой помочь в поиске методики для определения фракций фосфолипидов в желтке птичьего яйца |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
sinthetic Пользователь Ранг: 3590 |
01.12.2009 // 7:35:35
По-моему, есть в: Кейтс "Техника липидологии". Поищите её в сети. |
||
|
ктонибудь Пользователь Ранг: 7 |
06.12.2009 // 21:53:46
Выделяете липиды по Фолчу, готовите 1% раствор в хлороформе, наносите образец на пластину с силикагелем (ТСХ), разгоняете в камере в системе растворителей, сушите, проявляете в парах иода, соскребаете пятна фракций в отдельные пробирки (для идентификации ФЛ желательны стандарты), добавляете хлорную кислоту, сжигаете в ней (на плитке), затем проводите определение содержания неорганического фосфора (кипятите на водяной бане с раствором хлорной кислоты, молибдата аммония и аскорбинки). Затем - спектрофотометр. Соотношение неорганического фосфора в пятнах на хроматограмме - соотношение фракций ФЛ. От желтка до конкретных цифр - примерно неделя работы. Подробности изложены в многочисленных статьях. Если будут вопросы - пишите на эл. почту. |
||
|
sinthetic Пользователь Ранг: 3590 |
07.12.2009 // 0:27:09
Для полуколичественного определения достаточно конц. сернягой хроматограмму опрыскать. На силикагеле с фронтом там уползают нейтральные, ниже ФХ, ещё ниже ФЭА, у старта всякая липопротеиновая шняга. Систему, АФАИР, мы юзали хлороформ-метанол. Соотношение подзабыл, но его легко подобрать. 5:1, что ли? |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
07.12.2009 // 14:29:05
Редактировано 1 раз(а) Не проблема. Я разрабатывал методологию для легочного сурфактанта с использованием количественной ТСХ. По экстракции фосфолипидов см. "Практикум по биохимии" М.,МГУ 1989, под редакцией Северина С.Е. Там все подробненько написано как извлечь. А для анализа понадобится ТСХ пластинка, 3 % раствор борной кислоты спиртовой, 10 % раствор фосфорно-молибденовой кислоты, хлороформ, метанол и 25 % аммиак, стандарты фосфолипидов Sigma, только извлеченные из яйца (from Egg)! Ну ... и компьютер, сканер и программа обработки ТСХ пластин. Пластинки моете в метаноле и одновременно импрегнируете борной кислотой. Короче, в кювету помещаете пластинку, заливаете 3 % раствором борной кислоты спиртовым (лучше метанольным, но можно и этанольным), выдерживаете минут 5 помешивая раствор. Затем вынимаете и в сушильный шкаф на 1 час при 105-110 С для активации. В ТСХ камеру заливаете смесь хлороформ:метанол: 25 % аммиак в соотношении (65:35:8) и насыщаете камеру 1 час. На подготовленную и активированную пластинку наносите растворы стандартов и растворы проб из расчета, чтобы в нанесенной точке количество отдельного фосфолипида не превышало 10 мкг (иначе линейности не увидите, а будет Кубелка-Мунк). Далее хроматографируете и после тщательного высушивания окунаете на пару секунд пластинку в раствор (этанольный) 10 % фосфорно-молибденовой кислоты. Избыток раствора удаляете фильтровалкой и греете в сушильном шкафу минут 10 при 100-110 С. Ну а далее сканируете и обрабатываете соответствующим ПО. Порядок следования фракций легко определите по стандартам, но приблизительно следующий снизу-вверх фосфатидилинозин/серин - сфингомиелин - лецитин-лизолецитин-фосфатидилглицерин(кардиолипин)-кефалин. Ну еще в промежутках между основными фракциями могут быть из лизоформы. |
||
|
Шуша Пользователь Ранг: 2736 |
07.12.2009 // 16:47:22
Ага, по адресу "На деревню - дедушке(собака)mail.ru"  У остальных прошу прощения за оффтоп, но не смог удержаться. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
ктонибудь Пользователь Ранг: 7 |
09.12.2009 // 20:35:06
да, правда, оплошала. Адрес shevchenko{coбaчkа}ib.komisc.ru |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 6 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
