| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ESI-MC(Q). Олигонуклеотиды. >>>
|
 |
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
 03.03.2010 // 20:56:09
Редактировано 1 раз(а) В общем, не "фонтан". На том же Оазисе пробовал уже (кулинария!!!) отмывать ацетатом аммония, потом водой, и рекавери проверял (50-60%)... никак. Что-то иногда "наклевывается" (с аммиаком), более менее воспроизводимо, но вид у пиков такой, как будто я их в CIDе "драконил" и интенсива никакая, когда напряжение на конусе поднимаю относительно высоко - 100В (in sourсe fragmentation), и они пропадают. Напряжение на капилляре держу в области "короны"(3,5-5кВ). Посмотрел "картинки" у людей, чтобы себя подбодрить  Красиво  . С гидрофильной, после более подробных полетов, получается, что один олиг в мертвом, один где-то на границе, третий удерживается кде-то с К=1-2, если, конечно, два последних это олиги, МС не снимал.Кстати, насчет ИПХ, Вы делали с чем? А то, я смотрю многие пишут ИПХ, ИПХ на С18 (+МС), в основном, с триэтиламмоний катионом. Кстати: Не вьехал, насчет Reduction of Salt Adduction in Oligonucleotide or Nucleic Acid Samples Using Ethanol Precipitation (см. Materials) |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
04.03.2010 // 14:35:49
Я не знаком с Оазис, но первое что бы я попробовал это посадить и смыть что то известное, понятное и по возможности чистое, какой либо стандарт. Когда это сработает, "посолить" стандарт NaCl и повторить эксперимент. Если сработает, "посолить" буферным компонентом который народ пользовал в ВЭЖХ (у вас олиги чищенные ВЭЖХ или нет). И тогда идти на реальные образцы. Потому что иначе получается странная вещь, оптическая плотность собирается а сигнала нет. А вообще нуклеотиды сами видно ОК? Если нет стандарта, может АТР что ли заколоть и посмотреть выживет ли - хотя это, конечно, не показатель, но хоть что то. Хотя бы, работатет ли отрицательная мода в принципе (у меня был случай кто то из студентов сдуру забил какие то безумные вольты в сцеме и они жили там долго потому что отрицательную моду по полгода не пользовали. Но мне повезло, там вообще ионного тока не было, нашел быстро.) С преципитацией я дела не имел, всегда казалось что потери будут слишком велики. Даже не пытался. Как то все работало. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
04.03.2010 // 18:22:09
Редактировано 1 раз(а) Беру тайм-аут (другие аналиты "прикатили"). Модельный эксперимент - логично, попробую, спасибо. Да, странно. В отрицательной, сейчас, работаю даже больше, чем в положительной (правда в основном с <900Da), поэтому... (все равно, после первых неудач сразу проверил отрицательную моду, как обычно это делаю) После Оазиса - делал только прямую инфузию, в ВЭЖХ не колол (колол, как уже писал без всякой обработки, на силикагеле, видно ОК, 260нм макс. как надо, только пиков больше чем один). Синтетики чистят ТФЭ на С18, перед этим они осаждают олиги перхлоратом лития+еще что-то, потом отмывают. Метода, говорят, отработанная. Странно. Буду искать "корни", может где-то, что-то упустил. Спасибо. |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
07.03.2010 // 11:16:30
В смысле кластеров хуже лития просто ничего нет с большим отрывом от, скажем, натрия. Когда нужно кого-то загнать в кластер попрочнее так чтобы МС/МС с него делать и при этом молекула разваливалась, а не катион отскакивал - добавляем литий. Убойная вещь для олигосахаридов, липидов, стеролов и может чего еще чего я не закалывал Если "+ еще что то" это детергент типа тритона или NP40, то это полный нереанимируемый превеД! Если у синтетиков это отработанная метода и они (понятное дело) откажутся что то менять, почему бы вам не попросить у них аликвоту до осаждения перхлоратом и самому сконцентрировать / почистить на картридже? Им же нужны препаративные количества, а вам хватит с десяток пикомолей. |
|||||
|
SIG Пользователь Ранг: 1214 |
07.03.2010 // 14:49:14
Уважаемый Spectrometrist, меня очень заинтересовала информация об устойчивости литиевых кластеров. Как Вы полагаете, сохранится ли она в случае использования лазерной десорбции? Дело а том, что мне надо получить масс-спектры с неких дикетонатных комплексов, и похоже, что там летят именно кластеры ( с Na и K), но не лиганд, и не комплекс. Я думаю, что в таком случае можно добавить литиевую соль в образец, и бахнуть лазером. Если комплекс образуется даже со следами металлов из воды, наверное добавка соли должна кардинально улучшить дело. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
08.03.2010 // 2:54:00
А почему бы и нет? Единственно, я бы замешал серию с тем же аналитом, но солью в разных разведениях, шел бы с шагом так 10х для начала. Во первых, надо посмотреть как оно кристаллизоваться будет и лететь? И во вторых, чего вы точо захотите избежать это множества кластеров: скажем с натрием, двумя натриями (но одним зарядом, естественно); с калием; с литием; с литием и натрием и т.д. и т.п. |
|||||
|
SIG Пользователь Ранг: 1214 |
08.03.2010 // 15:39:35
Да, надо будет тогда попробовать. Есть еще гроссмейстреский вариант - получить литий сразу на внешней сфере комплекса, и надеятся что он будет хорошо лететь. Тогда все остальное уйдет в фон, как я полагаю. Спасибо за идею!
|
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
17.03.2010 // 16:46:55
Редактировано 1 раз(а) Пробовал еще на SCX - ноль. Я даже из ионного источника кое-что убрал В общем, получилось только напрямую, т.е. сразу после синтеза "отбирал" у синтетиков сэмпл и чистил сам (эксклюзионка) + получалось даже без очистки. Без аммиака спектры получаются "чище". Special thanks to Spectrometrist |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
18.03.2010 // 0:41:42
Замечательно! Кстати, очень хорошо что вы подробно описывали эксперименты - это же ценный архив практического опыта! Статью же по этому поводу не напишешь, а проблема есть. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
19.03.2010 // 13:34:37
Да, проблема есть... Ни в одной статье, посвященную данной теме, которую я смотрел, не было акцентирования на таких проблемах. И весьма вероятно, что катион лития - действительно, убойная вещь. В следующем "заходе", попробую еще, все-таки, SAX. Есть еще мысль, специально для данной ситуации - +HF или (NH4)2CO3, выдержать, а затем эксклюзионкой. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 24
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
