Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ.Уменьшение времени выхода аналита.

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ.Уменьшение времени выхода аналита. >>>

  Ответов в этой теме: 23
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: ВЭЖХ.Уменьшение времени выхода аналита.

MaestrO
Пользователь
Ранг: 130

22.01.2011 // 14:39:03

Редактировано 1 раз(а)

Здравствуйте.
При анализе вещества (окситетрациклин) на колонке Phenomenex Luna C18, в изократическом режиме (пока, чтобы не было подозрений на градиент) соотношение вода-ацетонитрил (65:35), время выхода пика изменяется 7мин, 4.9мин, 4.2 мин, 3.5 мин потом может и в течение 15 минут не выйти. После 20 минуты смываю усиливая ацетонитрилом элюент. Почему такая нестабильность я не понимаю.
Подскажите, пожалуйста, в чем я ошибаюсь.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

MeOH
Пользователь
Ранг: 487

22.01.2011 // 15:04:52

MaestrO пишет:
Здравствуйте.
При анализе вещества (окситетрациклин) на колонке Phenomenex Luna C18, в изократическом режиме (пока, чтобы не было подозрений на градиент) соотношение вода-ацетонитрил (65:35), время выхода пика изменяется 7мин, 4.9мин, 4.2 мин, 3.5 мин потом может и в течение 15 минут не выйти. После 20 минуты смываю усиливая ацетонитрилом элюент. Почему такая нестабильность я не понимаю.
Подскажите, пожалуйста, в чем я ошибаюсь.

Пожалуйста полный симптомокомплекс.
Как выходили(минуты) OTC, 4-epioxytetracycline, tetracycline(если есть). на изократике отлично делятся. И луна у вас просто или (2)?
И каким таким образом время менялось? На столько больше или меньше удерживалось, (скорее 2е)? Это серия заколов или новый анализ с новым элюентом? Давление стабильно? не поленитесь киньте хроматограмму
Что значит не было подозрений на градиент?))
И ацетонитрила 35% для тетрациклинов на луне и так прилично

MaestrO
Пользователь
Ранг: 130

22.01.2011 // 15:46:53

Редактировано 3 раз(а)

Пожалуйста полный симптомокомплекс.
Как выходили(минуты) OTC, 4-epioxytetracycline, tetracycline(если есть). на изократике отлично делятся. И луна у вас просто или (2)?
И каким таким образом время менялось? На столько больше или меньше удерживалось, (скорее 2е)? Это серия заколов или новый анализ с новым элюентом? Давление стабильно? не поленитесь киньте хроматограмму
Что значит не было подозрений на градиент?))
И ацетонитрила 35% для тетрациклинов на луне и так прилично

Анализирую только OTC(нету ТС и 4-ETC).Проблема не сколько в разделении (другие компоненты я вообще щас убрал), а в нестабильности результатов (даже времени удерживания одного компонента).
Луна просто, а не 2 (не видел чтобы в ее спецификации,названии была указана 2). Между прочим, а чем луна двойка отличается?
Время менялось от 7 минуты потом до 3.5 потом вообще не вышел ,иногда в мертвом времени выходит. Если бы еще только уменьшалось, а то и вообще не выходит порой (подозревал что не вколол, ан нет усилил элюент и он вышел)
Это серия закалов одного и того же раствора ОТС (приготовленного из порошка который в аптеке купил, пик один стало быть и подозрений на его загрязненость нету), на одном и том же элюенте. Из двух тех же самых емкостей берет ацетонитрил и бидистиллят. Короче один и тот же элюент.
Что касается давления, так держится около 84 атм (80-90). при увеличение ацетонитрила до 60% (что удивляет!) также держится около 84 атмосферах.
Под подозрениями на градиет я имел ввиду последнюю ступень кондиционирования колонки, т.е. возможно малое количество времени промывки после анализа не успевает вернуться в исходное состояние. Поэтому решил упростить чтобы легче диагностировать проблему.
Хроматограмму кинуть пока нет возможности.

MeOH
Пользователь
Ранг: 487

22.01.2011 // 19:14:24

MaestrO пишет:

Анализирую только OTC(нету ТС и 4-ETC).Проблема не сколько в разделении (другие компоненты я вообще щас убрал), а в нестабильности результатов (даже времени удерживания одного компонента).
Луна просто, а не 2 (не видел чтобы в ее спецификации,названии была указана 2). Между прочим, а чем луна двойка отличается?
Время менялось от 7 минуты потом до 3.5 потом вообще не вышел ,иногда в мертвом времени выходит. Если бы еще только уменьшалось, а то и вообще не выходит порой (подозревал что не вколол, ан нет усилил элюент и он вышел)
Это серия закалов одного и того же раствора ОТС (приготовленного из порошка который в аптеке купил, пик один стало быть и подозрений на его загрязненость нету), на одном и том же элюенте. Из двух тех же самых емкостей берет ацетонитрил и бидистиллят. Короче один и тот же элюент.
Что касается давления, так держится около 84 атм (80-90). при увеличение ацетонитрила до 60% (что удивляет!) также держится около 84 атмосферах.
Под подозрениями на градиет я имел ввиду последнюю ступень кондиционирования колонки, т.е. возможно малое количество времени промывки после анализа не успевает вернуться в исходное состояние. Поэтому решил упростить чтобы легче диагностировать проблему.
Хроматограмму кинуть пока нет возможности.

так вот сколько ни проверял эти порошки там всегда есть тетрациклин и 4-эпиокситетрациклин. даже аналитический стандарт имеет эпиформу ибо деградация в кислой среде, а я в кислой делаю. Они выходят недалеко перед ОТЦ и по площади не более 0.5%.
Про луну, конкретнее про её октадецил - 1 и 2-феноменекс решила больше не выпускать 1 теперь только 2 и то этот сорбент тоже быстро сдаёт позиции, с аналогичными свойствами хороши их новые Gemini или Gemini NX. В общем в этой цепочке растет симметричность пиков и время выхода. в луне 2 в отличие 1й по другому кепирован, там меньше металла и "открытых" силанольных групп
К такому может привести ряд моментов отдельно или в комплексе. Тут важно что за система
1. Этиология: Загрязнение колонки, полости в колонке, просто мертвая колонка)) . Диагностика: Попробовать
другую.
2. Если градиент низкого давления. Этиология: проблемы с переключателем между фазами, грязь в переключателях в клапанах в смесителе. Диагностика: Пустить смесь По А потом по Б на изократике. Лечение: На байпас потоком побольше промыть.
3.Если градиент высокого давления. Этиология: проблемы с переключателем между фазами, грязь в клапанах в смесителе, воздух в насосах(давление стабильно, то вряд ли). Диагностика: Пустить смесь По А потом по Б на изократике. Лечение: На байпас потоком побольше промыть. Воздух из насосов удалить: по модели по разному
4. Проблемы с инжекцией-маловероятно

Теоретически можно представить какое давление дает Луна на воде в хорошем состоянии если вдруг оказалось что ваш ацетонитрил не идет 250*4.6 при 0.5 мл как раз гдето так даёт или 150*4.6 при 0.7. Может у вас только вода качается, тогда фаза заколапсировалась, и нужно мыть ацетонитрилом.
ДАйте на неё чистого ацетонитрила на часок.
И еще ацетонитрил(А) и воду(Б) градиентом не очень пускать-лучше смеси: в одной больше ацетонитрила(90:10) в другой меньше-так стабильнее(10:90).
Еще тетрациклины любители метанола как только добавишь хотябы 3% симметричность и разделение улучшаются на порядок

MaestrO
Пользователь
Ранг: 130

22.01.2011 // 20:16:01

Редактировано 3 раз(а)

Да, в этом порошке я наблюдал маленькие пички перед основным пиком относительно малой площади. Деградацию замечал потому, что цвет водного раствора даже меняется на оранжеватый.
Колонка наверно все-таки рабочая, я на ней несколько месяцев работаю. Без экстремальных режимов pH ниже 3 она не видела, соли было менее 0.03 M, храню 60/40 ацетонитрил вода. Да и предколонка стоит, которую я кстати сегодня поменял, какой то черный налет был, может от шприца накопилось (похоже на серый налет на стенках от штока).
Что касается системы, то градиент низкого давления. Я этот блок сразу же посмотрел на фритах чисто. Единственное когда ставлю фазу D на 100 процентов и поднимаю заборник в емкости А замечаю что потихоньку тянет ацетонитрльчик (но правда мало). Другие линии в такой ситуации не тянут ничего. Но что могло произойти от этой течи, она не значительна. Как вариант заглушить эту линию и перейти на другую.
Байпас - это вроде как обход, но как его реализовывают я не до конца понял. Поясните пожалуйста.
Инжекция ручным вводом, думаю что она впорядке.
Колнка 150 на 2.1, при скорости потока 0,2. В паспорте на колонку 882 psi (61 атмосфера где-то) при 75 ацетонитрила. Учитывая что у меня больше водной фазы и предколонка (+5 атм) где то на то и выходит 80 атм.
Но если бы фаза заколапсировалась, пик должен выходить в мертвом времени, или я ошибаюсь?
За советы спасибо. Метанол добавить неплохо было бы но в нашей лаборатории он не так доступен

MeOH
Пользователь
Ранг: 487

22.01.2011 // 22:53:56

пайпас это на слив до колонки, можно разогнать насосы до максимума 10 мл в мин и подождать при этом менять соотношения А B C D.
Если вся заколапсировалась то при таких условиях мертвым выйдет но может и не вся))

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Ассоциация аналитических центров «Аналитика»
Ассоциация объединяет специалистов в области прикладной аналитической химии и работает под эгидой Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации (Ростехрегулирование) и Научного Совета по аналитической химии РАН (НСАХ РАН). В Ассоциацию входит более 130 членов - лабораторий отраслевых и академических институтов, ВУЗов, организаций Ростехрегулирования, предприятий различных форм собственности.

MaestrO
Пользователь
Ранг: 130

23.01.2011 // 10:32:31

Спасибо за советы, короче говоря склонен считать что проблема в самом хроматографе. Закалапсировать я сознательно не мог больше 90% воды не давал, да в последние время и 90 не было. Только если хроматограф сам сбоя дал и накачал туда чего хотел.
Попробую перейти на другую линию, заглушив протекающую, на байпас проверю качает ли он то что его просят.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

25.01.2011 // 4:20:27

Эээ.. а капли-то из колонки считали? На миллилитр в минуту накапывает?

MaestrO
Пользователь
Ранг: 130

25.01.2011 // 11:07:19

капли не считал, но где-то каждые 4-5 секунд, отрывается. одним словом, наберется за минуту думаю не мл, но 0.2 мл (0.2 мл/мин была скорость).

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

25.01.2011 // 23:51:54

А тестовую смесь поколоть? Например, напиток "колокольчик"?