| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ с спектрофлюориметрическим детектором >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ с спектрофлюориметрическим детектором | |||||
|
DDT Пользователь Ранг: 73 |
 16.02.2011 // 18:02:37
Здравствуйте. Начинаю заниматься жидкостной хроматографией, до этого занимался газовой. У нас хроматограф Shimadzu с флюориметрическим детектором. Задача: определять бензапирен в рыбе. Не могу понять такую вещь: С самого начала посоветовали, что я и сделал, приготовить раствор антрацена в ацетонитриле, для проверки работоспособности детектора. Я приготовил три калибровочных раствора с концентрациями 0,5 мкг/мл ( 500нг/мл ) и 0,1 мкг/мл ( 100 нг/мл), 0,01 мкг/мл (10 нг/мл). У нас в инжекторе стоит петля на 10 мкл. Это меня смущает и я не совсем понимаю, сколько поступает в колонку Если я вкалываю 20 мкл раствора с массовой концентрацией 500 нг/мл, то что в колонку поступает как бы 10 мкл раствора, тоесть 5 нг антрацена. А если я вкалываю 20 мкл раствора с массовой концентрацией 10 нг/мл, то что в колонку поступает как бы 10 мкл раствора, то есть 0,1 нг антрацена. А если я виду 6 мкл раствора с массовой концентрацией 10 нг/мл , тогда … Для чего это петля? Правильно ли проверять показания с помощью этого вещества? Рекомендуют в качестве подвижной фазы использовать ацетонитрил:вода в соотношении 80:20. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
VelikanovAV Пользователь Ранг: 469 |
16.02.2011 // 18:08:40
Петля - для обеспечения воспроизводимости ввода. То есть наиболее правильно всегда вводить в кран-дозатор избыточный объем пробы (микролитров 50 хотя бы), тогда объем, попадающий в колонку будет определяться объемом петли. |
|||||
|
ЮН Пользователь Ранг: 495 |
16.02.2011 // 18:57:35
Объем Вашей петли - это и есть объм пробы, попадающей в колонку. Т.е. из объма пробы, который вы берете шприцом, в колонку попадает всегда только 10 мкл - величина постоянная (если не менять петлю). Объем пробы шприцом берется в количестве не менее 5 кратного объма петли, в Вашем случае не менее 50 мкл. Такой объем гарантирует полную промывку канала пробы в инжекторе пробой. Последние 10 мкл пробы, оставшиеся в петле и идут в колонку при повороте рычага инжектора. По какой методике собираетесь делать БАП в рыбе ? |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
16.02.2011 // 20:56:29
В 80-х годах прошлого тысячелетия была статья, специально посвященная этому вопросу. Оказалось, чтобы достичь заполнения петли на 99 и более процентов нужен избыток по объему не менее 12-кратного. И, поскольку Вы ранее занимались газовой хроматографией, обратите внимание на коренное отличие пользования шприцем при вводе: чем медленнее Вы вводите образец в петлю, тем лучше ее заполнение из-за ламинарного характера движения жидкости в капилляре петли и пристеночного эффекта. |
|||||
|
ЮН Пользователь Ранг: 495 |
16.02.2011 // 21:48:40
Редактировано 2 раз(а) Это идеально. Но в практике, при постоянных условиях ввода, степень заполнения петли пробой будет практически постоянной, пусть даже равной хотя бы и 90%. А так как и градуировка и ввод проб производятся в постоянных условиях, через одну петлю, то и ошибка будет пренебрежительно мала, которой и пренебрегают. Конечно, можно порассуждать о разной вязкости проб и град. растворов и т.п. - но стоит ли. |
|||||
|
DDT Пользователь Ранг: 73 |
16.02.2011 // 23:16:27
Редактировано 1 раз(а) Большое спасибо всем за подробный ответ на один из вопросов. У меня две методики 1) ГОСТ P 51650-2000 и 2) через яндекс Свидетельство №30-08 от 04.03.2008 Методика выполнения измерений массовой доли бенз(а)пирена в пищевых продуктах, продовольственном сырье, пищевых добавках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии Хотел попробовать вторую, но там температуры колонки пятьдесят градусов,а у меня комнатная. Думаю не подойдет... В первой непонятно про ацетилированную целлюлозу. Интересно, где можно найти, как правильно делать поверку хроматографа Shimadzu c флюориметрическим детектором. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
17.02.2011 // 2:22:43
ГУРУ!!! 
|
|||||
|
VelikanovAV Пользователь Ранг: 469 |
17.02.2011 // 11:03:16
Речь здесь идет скорее не о просто заполнении, а о промывке с последующим заполнением. Так вот, в свое время я проверял разные способы заполнения петли и выяснил, что если перед тем, как заполнять петлю новой порцией анализируемого раствора, продуть ее воздухом (пустым шприцом), то петля нормально заполняется заметно меньшим объемом нового раствора и результаты стабильнее. |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
17.02.2011 // 13:00:04
А вот до этого я не додумался. Спасибо! |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
17.02.2011 // 13:00:51
Сам такой! 
|
|||||
|
ЮН Пользователь Ранг: 495 |
17.02.2011 // 13:28:45
Редактировано 2 раз(а) Да, идея (Velikanova) интересная, можно будет попробовать. Обращаюсь к ДДТ. Методика на БАП по ГОСТу очень трудоемкая, только пробоподготовка по одной параллели займет у Вас дня полтора, а то и два. Эта методика разработана в ИП РАМН, и я, честно говоря, не знаю кто еще работает по ней, кроме них. Впервые она была опубликована в их сборнике в 1998, в ГОСТ вошла с небольшими изменениями, которые ее не облегчили. Я делаю по методике ЗАО "Аквилон" с твердофазной экстракцией. Полный анализ (2 параллели) занимает примерно 4 часа. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 23
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
