| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
HILIC: где найти в Питере и оправдан ли выбор? >>>
|
 |
| Автор | Тема: HILIC: где найти в Питере и оправдан ли выбор? | ||
|
Entomo Пользователь Ранг: 9 |
 14.03.2011 // 19:13:54
Уважаемые биохимики, Вопрос таков: Пытаюсь выделить регуляторную молекулу из биологического материала методом ВЭЖХ. При предварительном пропускании образца через SepPak молекула элюируется 0,05% уксусной кислотой. Таким образом, гидрофильна. При последующей ВЭЖХ (уксусная кислота/ацетонитрил, градиент 1%/мин) все содержимое выскакивает на 2-ой минуте и разделения не наблюдается. Заменить противоион на ТФУ с целью удержать содержимое на колонке не выйдет, так как впоследствии лиофилизат фракций добавляю в культуру клеток, которые от ТФУ дохнут (а на уксусную к-ту реагируют нормально). В качестве доп.характеристик: молекула термостабильна; молеклярная масса, согласно фильтрам, меньше 3 кДа; природа неизвестна - ее присутствие в образце определяю лишь по реакции клеток, которым оный добавляю. Оправдано ли применение в этом случае HILIC? Если так, то где его можно сделать в Питере (в крайнем случае, в Москве)? Буду благодарен за советы и помощь. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
14.03.2011 // 20:47:18
Редактировано 2 раз(а) Задача творческая. Рекомендую найти хорошего универсального спеца, поставить четко ему задачу, а дальше дело техники и времени. К сожалению, в Питере никого подсказать не могу. Вариантов тьма, особенно учитывая тот факт, что, по сути, строго ничего неизвестно, а следовательно в ходе "работы" может выяснится много "интересных" моментов (например то, что соединение, на самом деле - соединениЯ и др. "сюрпризы"). Если в Питере никого не найдете, можете обратиться ко мне (Москва) - я или сам помогу (есть опыт и все необходимое, но может не быть времени), или дам вектор. |
||
|
Entomo Пользователь Ранг: 9 |
14.03.2011 // 23:22:12
Большое спасибо. У нас тут обратная ситуация: специалисты есть, колонки нужной нет) Поэтому советов идти в обход уйма: мол, смывать ТФУ, а потом ее смолами убирать из фракции.. Но решил поискать более простой и быстрый способ разделения. А с широкопрофильными спецами, что верно, то верно, везде напряг. К "сюрпризам" готов. Но нет их пока) Все ж таки подожду ответа из Питера. Вдруг кто поближе объявится. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
15.03.2011 // 0:34:57
Редактировано 3 раз(а) Неверно понял. Найдите для начала простой "силикагель", желательно современный и "чистый" (металлы), и желательно с порами 120-300А, хотя, для начала и 60А пойдет, но скорее всего получится... "не очень". А дальше дело техники (хотите HILIC, хотите PALC). Думаю, в Питере найти ВЭЖХ колонку, например, 250*4,6мм с простым силикагелем, как два пальца... Есть же еще куча вариантов. Если кроме Sil C18 ничего нет - модифицируйте поверхность (динамически). Подумайте об ИПХ (т.е. вместо ТФУ, что-то другое и более гидрофобное, + попробовать с "другой стороны" - ТЭА и т.д.). Можно еще HIC "подключить". Кстати, проверьте (на С18) зависимость удерживания вашего сорбата от % МеСN (например), т.е. с увеличением % в каком-то диапазоне, может увеличиваться удерживание. Проверьте влияние рН. Только не до конца понимаю затею: Вы хотите выделить аналит, а затем прямо эту фракцию в клетки добавлять и смотреть "биологический ответ"? |
||
|
Entomo Пользователь Ранг: 9 |
16.03.2011 // 21:30:12
Редактировано 1 раз(а) Еще раз спасибо. Переговорил с нашими хроматографистами. Оказывается, та ОФ ВЭЖХ, которую делаем, идет с ионной парой. Насчет HILIC поддержали, но не уверены, что я найду в России полупрепаратив гидрофильной хроматографии. Аналитическая колонка не подходит по причине большого количества сухого материала (1 грамм!). По этой причине поищу еще несколько грубых методов для дальнейшей пробоподготовки с целью по максимуму концентрировать искомое и уменьшить вес. Все усложняется тем, что поскольку молекула регуляторная, ее в образце содержится мизер и большого количества имеющегося вещества хватит лишь на десяток биологических тестов. Фракции сушу, затем растворяю в MQ и добавляю в культуру клеток. Реакцию оцениваю по уровню биологического ответа. В дальнейшем предполагаю синтезировать найденное химическим путем. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
16.03.2011 // 22:24:09
Редактировано 1 раз(а) Пользователь удалил свое сообщение |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
16.03.2011 // 22:24:58
Сначала надо аналитическую HILIC сделать, а затем на полупрепаратив переходить, а то, может, там c HILIC то же "крутить и крутить" (не понятно в какую сторону). В идеале, конечно, нужно полупрепаративную колонку с тем же сорбентом иметь или подбирать посредством тестов аналогичную. На этом этапе упирается все скорее в подбор всех условий и решение хром. задачи, остальное - дело второстепенное (полупрепаративная ВЭЖХ система и т.д.) Полупрепаративную HILIC найдете, если хорошо поищете  В остальном понятно - "пахать и пахать" З.Ы.: Да, от балласта надо срочно избавляться - не хорошо это "иголку в стоге сена" таскать... |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
16.03.2011 // 22:52:08
Один мой старый знакомый убил 2 года на выделение "озверина". В конце объект оказался ионом цинка.  Смотрите, не попадитесь на такую же удочку. Может сначала начать с эксклюзионной хроматографии?
|
||
|
Entomo Пользователь Ранг: 9 |
16.03.2011 // 23:41:12
Редактировано 1 раз(а) Мысли о гель-фильтрации возникали тоже (благо дело, имеется), но, опять же, вещества слишком много пока. В качестве пробоподготовки склоняюсь к мысли о чем-то древнем типа осаждения ненужностей сульфатом аммония: вычитал, что гидрофильные вещества так поделить можно. Однако процентный диапазон добавляемой соли для осаждения гидрофильных соединений пока не нашел - видимо, опытным путем придется.. ПС. А как в итоге Ваш знакомый цинк-то обнаружил? Сам я на всякий случай опроверг "литературную" версию о влиянии на мои клетки перекиси и оксида азота 
|
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
17.03.2011 // 1:15:59
Редактировано 1 раз(а) 2 года - это еще немного Главное, что задачу "добил" до конца! Относительно много таких историй было и будет...Обсуждаемая задача - с горизонтом от 1 года. (ИМХО) Хорошо (относительно время- и трудозатрат) еще, если попадется что-то (одно или несколько) уже известное и изученое. Насчет "высаливания": в данной ситуации - это "слепая кулинария", с весьма вероятным отрицательным результатом. (ИМХО) Но Вы попробуйте... Комбинаторика, конечно, хорошо, но... |
||
|
Олег Пользователь Ранг: 529 |
17.03.2011 // 16:09:00
Гель-хроматографию можно проводить на колонках большего размера, раз 10 - 15 поделите (это дней 10-15), и разделите... А не хотите попробовать колоночную малого давления хроматографию с силикагелем, модифицированным SiMe3? Если не секрет в какой организации работаете и на каких объектах проводите испытания? |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
