| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Способы очистки холестерина >>>
|
 |
| Автор | Тема: Способы очистки холестерина | |||||
|
spectro Пользователь Ранг: 22 |
 14.10.2003 // 11:33:47
Подскажите, пожалуйста, способы очистки холестерина для использования его в качестве стандарта. Если возможно, укажите, пожалуйста, источники (литература, интернет и т.п.) этих методов. Благодарю. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
14.10.2003 // 11:59:43
Давайте для корректной постановки задачи выясним некоторые вопросы. 1. Сколько нужно очищенного вещества, единицы миллиграмм, десятки, сотни? От этого зависит масштаб Ваших дальнейших действий. 2. Каков допустимый уровень присутствия примесей в очищенном препарате? То, что это стандарт - ничего не говорит. Для ВЭЖХ- и ТСХ-стандартов достаточная чистота может разниться в несколько десятков раз. 3. Чем загрязнено исходное вещество? Если это весьма отличающиеся по свойствам от холестерина соединения, например, белки, то можно обойтись твердофазной экстракцией. Если это нечто родственное (что-нибудь из липидов), то придется ставить микропрепаративный (или полноценно препаративный, см. п.1) вариант колоночной хроматографии, а то и ВЭЖХ. Учитывая, что подобные работы длительны, обходятся недешево, да и без гарантии конечного результата, может есть смысл заказать стандарт холестерина на фирме? Или это работа для души? |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
14.10.2003 // 17:02:18
Вообще, это что-то новенькое, вернее хорошо забытое старенькое. Холестерин сейчас на самом деле практически все покупают. Но его можно и приготовить просто и отличного качества. Берем животный жир. Лучше всего свиное сало, только свежее. Режем на дольки и экстрагируем хлороформом. Можно хлороформом с метанолом (этанолом). Полученный экстракт сушим над сульфатом натрия безводным или сульфатом магния. Упариваем досуха в вакууме. Сухой остаток заливаем спиртом в котором растворен КОН, ставим на кипячение с обратным холодильником, минут за 30 ть триглицериды и другие сложные эфиры превращаются в этиловые эфиры, добавляем воды в колбы поддерживая кипение. Воды должно добавить где-то половину от объема реакционной смеси. Покипятив минут 30. Остужаем до комнатной температуры и эктрагируем реакционную смесь гексаном (петролейным эфиром). Полученый экстракт промываем водой, сушим над безводными сульфатом натрия или магния. В этом экстракте содержится практически чистый холестерин. Вернее, технически чистый, так как примеси все же имеют место быть. Упариваем досуха этот экстракт и взвешиваем его. Умножаем этот вес на 20-30 и берем столько грамм силикагеля для колоночной хроматографии. Наносим на колонку экстракт и хроматографируем в ступенчатом градиенте эфира в гексане (петролейном эфире). От 0% до 25%. Холестерин имеет Rf 0.5 (около) в системе 1:1 (эфир-гексан), и если пластинку опрыскивать 5% раствором серной кислоты в этаноле (метаноле) и потом нагреть, он дает розовое - бордовое пятно. Фракции содержащие холестерин собираем упариваем и при необходимости делаем препаративную ВЭЖХ на прямой фазе - силикагеле немодифицированном система - гептан - изопропиловый спирт 1000:5. Так получаем бесцветный кристаллический продукт чистотой >99.5%. |
|||||
|
spectro Пользователь Ранг: 22 |
03.11.2003 // 11:15:01
Прошу прощения, что сразу не ответил. Несколько уточню проблему. Нужно почистить имеющийся препарат холестерина. Количества от нескольких миллиграммов до граммов. Необходимая чистота по ВЭТСХ - 99 + %. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
03.11.2003 // 12:02:26
Дима все довольно исчерпывающе описал. Если исходить из довольно чистого препарата, проще всего организовать доочистку на препаративной колонке с силикагелем (даже не ВЭЖХ). Дима тоже в общих чертах все рассказал. Я бы предложил эмуляцию твердофазной очистки. А именно - нанести на колонку холестерин, провести промывку системой гексан:хлороформ 90:10, затем элюировать чистый продукт смесью гексан:изопропанол 95:5. Правда,неизвестно, что там за примеси и будет ли такая очистка эффективной. Чтобы не работать вслепую, можно для начала попробовать разные системы растворителей на ТСХ, а затем,смело переносить наиболее оптимальный вариант на колоночную хроматографию. На колонке диаметром 20 мм, думаю, за 2-3 раза можно получить около грамма чистого продукта. |
|||||
|
spectro Пользователь Ранг: 22 |
06.11.2003 // 14:04:47
А что можете сказать о методе бромирования и последующего дебромирования холестерина по двойной связи? Он часто упоминается в статьях как метод предварительной очистки стандартных препаратов холестерина. При этом ссылаются на оригинальную методику описанную в Fieser, L. F. 1953. Cholesterol and companions. III. Cholesterol, lathosterol, and ketone 104. J. Am. Chem. Soc. 75: 5421-5422. Ведь окисленные формы холестерина тоже могут иметь двойные связи. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
06.11.2003 // 14:30:15
Редактировано 1 раз(а) Извините, конечно, и не обижайтесь. Обратите внимание на год ссылки. Если провести аналогию, то вы спрашиваете совета по приобретению некого средства передвижения и Вам дают совет относительно автомобиля или на худой конец - мопеда. А Вы тут же говорите о хомуте и уздечке, мол, а не пригодятся ли и эти штуки. Имея столь мощный инструмент, как хроматография, нет необходимости проводить длительные и трудоемкие деривации целевого вещества, с последующем его восстановлением из деривата. В те стародавние времена хроматография не была так развита, и не входила в арсенал исследователей столь широко, как сейчас. И делали эти сложные манипуляции люди не от хорошей жизни, а чтобы добиться максимально различных свойств холестерина и примесей и, играя на этих различиях, используя сочетание обычных препаративных приемов (реэкстракция, осаждение, центрифугирование и т.п.), хорошо очистить препарат. Впрочем, если есть время и желание - попробуйте, но если важен сам процесс, а не результат. |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
06.11.2003 // 17:37:10
Леонид Вам все правильно написал.. Значит у холестерина одна двойная связь и один гидроксил. Я бы Вам не советовал использовать бром на холестерин. После того как Вы его к холестерину добавите, вероятность того что Вам удасться выделить пристойной чистоты продукт - сам холестерин - упадет раз в 20-ть.. Не заморачивайтесь. Легче его купить или сделать по методике. 
|
|||||
|
spectro Пользователь Ранг: 22 |
10.11.2003 // 10:42:19
Дело в том, что работа действительно была опубликована в 1953 году, но ссылки на использование этой методики очень часто встречаются в работах, вышедших в 90-е годы, причем в работах зарубежных авторов, где доступность хроматографии в самых разных ее вариантах намного выше. Кроме того, хроматография такой уж простой и надежный выход из ситуации. Многие старые приемы, хотя и вызывают у вас скепсис, мне кажется, обладают даже рядом преимуществ в этом плане. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
10.11.2003 // 12:12:17
Уважаемый Спектро! К сожалению, за рубежом исследователи очень узко специализированы и если он не использует хроматографию в 90-е годы, значит, он не владеет этим методом или не располагает соответствующим оборудованием. А как мы тут в России, работать на "двух кострюлях" за рубежом не привыкли, да и не обучены. В любом случае хроматография - самый тонкий и эффективный метод препаративного разделения и очистки органических веществ. И никакой другой препаративный метод с ним тягаться не может (разве что ректификация, которая по отношению к холестерину - неприменима). Можно посчитать стоимость и трудозатраты получения 1г. холестерина чистотой, например, 99,8% хроматографическим и любым другим методом. Уверен, сравнение будет не в пользу классических препаративных методов. |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
11.11.2003 // 22:57:47
Да они не скепсис вызывают, а вполне определенную настороженность, особенно когда в исходной статье, "восстановленный" холестерин не характеризуется ни спектроскопически ни хроматографически. Да и загрузочки там "киллограммовые". Вы объясните зачем он вам нужен-то.. Если в качестве стандарта для ВЭЖХ или ГЖХ или на ТСХ - одно дело, а если крыс откармливать чтобы те дохли от высокого холестерина и его производных - совсем другое дело. Множество методик по бромированию, дебромированию разработанных в 30-40-50 годах очень спокойненько ушли в прошлое, так как "восстановленные" соединения ни в какие рамки не лезут, с точки зрения ВЭЖХ и ГЖХ, а представляют собой смеси, достаточно сложного состава, причем этот состав зависит от грамотности и умелости химика (весьма сложным образом, кстати) 
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 21
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
