Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Посоветуйте "быструю колонку" для HPLC >>>

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Посоветуйте "быструю колонку" для HPLC
C_h_r_o_m_o
Пользователь
Ранг: 25

28.09.2012 // 14:42:18     
Добрый день всем!
По роду моей деятельности мне необходимо анализировать чистоту одного гидрофильного пептида. Сейчас анализ удовлетворительного качества занимает 20 минут. Колонка стандартная 4.6*25 см. Изократический режим.
Вопрос. Можно ли только используя более высокотехнологичные колонки сократить время анализа в 2-3 раза? При этом не выходя из области HPLC по давлениям? Если можно, что это за колонки?
Я мельком встречался с колонками длиной около 7 см и зернением 3мкм (если не ошибаюсь). Вроде это были колонки фирмы Merck Но это было давно. Так же я слышал что-то о колонках Grace Rocket? но тоже без подробностей.
Хотелось бы услышать мнение людей работавших с подобными колонками.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
varban
VIP Member
Ранг: 8699


28.09.2012 // 15:50:04     
А объем после колонки у Вас какой?
Если большой, то пики маленькой колонки размоет, как чернила в реке

--------------

Ой, что щас будет
Набигут милихромофилы и милихромофобы и устроят очередной холивар
C_h_r_o_m_o
Пользователь
Ранг: 25


28.09.2012 // 15:52:59     
Объём после колонки - 5 см капилляра. А потом кювета детектора.
varban
VIP Member
Ранг: 8699


28.09.2012 // 16:05:52     
А сколько в кювете? Если ведерная (5...10 микролитра), забудьте о таких размерах

Впрочем, вот холивар: www.anchem.ru/forum/read.asp?id=11588

А вот и маленькие колонки: www.anchem.ru/forum/read.asp?id=11856
Kalambet
Пользователь
Ранг: 484


28.09.2012 // 16:17:56     
есть еще POPLC
anchem.ru/forum/read.asp?id=4195
а также монолитные колонки...
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


28.09.2012 // 16:26:40     
Редактировано 2 раз(а)

Банально:

1. Уменьшить длинну колонки в 2-3раза, соотв. при этом, может быть, надо будет использовать сорбент с меньшим диаметром частиц, т.е. 3-4мкм вместо 5мкм.

2. Использовать монолитные сорбенты (Onyx, Chromolith). С использованием этих колонок можно уменьшить время анализа в 5-10раз (относительно Вашей системы).

В принципе, варианты 1 и 2 не требуют серьезной модификации современной аналитической ВЭЖХ системы (скорость сбора данных, экстраколоночный объем, насосы и т.д.).
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Водонепроницаемый ОВП метр UP-9821V Водонепроницаемый ОВП метр UP-9821V
Карманный тестер для измерения ОВП оптимален для полевых измерений, но также может использоваться в лаборатории. ОВП: ± 1999 mV Точность: ± 1mV
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
C_h_r_o_m_o
Пользователь
Ранг: 25


28.09.2012 // 16:40:32     
Редактировано 1 раз(а)


virtu пишет:
Банально:

1. Уменьшить длинну колонки в 2-3раза, соотв. при этом, может быть, надо будет использовать сорбент с меньшим диаметром частиц, т.е. 3-4мкм вместо 5мкм.

2. Использовать монолитные сорбенты (Onyx, Chromolith). С использованием этих колонок можно уменьшить время анализа в 5-10раз (относительно Вашей системы).

Я пытался работать с колонкой 2*50мм и зернением 2мкм. Ничего путного не вышло. Уменьшение длины компенсируется уменьшением скорости из-за возросшего давления.
Монолитные сорбенты, как я понимают при схожей эффективности имеют гораздо меньшее сопротивление и соответственно, дают возможность увеличить скорость потока?
C_h_r_o_m_o
Пользователь
Ранг: 25


28.09.2012 // 16:55:52     
Я посмотрел колонки Chromolith. Похоже это и есть те скоростные колонки которые мне встречались. Кто нибудь работал на них?
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


28.09.2012 // 21:10:02     

C_h_r_o_m_o пишет:


Я пытался работать с колонкой 2*50мм и зернением 2мкм. Ничего путного не вышло.
Вы читать умеете? В Вашем случае: 150-85мм * 4,6мм и 5 или, если не будет хватать эффективности, 3-4мкм. А вот на 50*2мм и 2мкм, без оптимизации экстраколоночных объемов (ячейка детектора, капилляры, инжектор и т.д.) Вашей ВЭЖХ системы, работать бессмысленно.

Если будете пробовать монолит - Chromolith HR, у простых Chromolith (= Onyx) эффективность ниже.
cholesterol
Пользователь
Ранг: 109


29.09.2012 // 11:54:49     

C_h_r_o_m_o пишет:
Я посмотрел колонки Chromolith. Похоже это и есть те скоростные колонки которые мне встречались. Кто нибудь работал на них?
Около 1 года назад озаботились проблемой сокращения времени анализа до 3-5 минут c 20-30 мин. Купили несколько колонок Kinetex C18 3*50mm 2.6мкм (поверхностно-пористый сорбент), Chromolith HR C18 4.6*50 (монолитная колонка второго поколения), Grace Platinum Rocket 7*50 1,5мкм (полностью пористый сорбент), Grace VisionHT С18P 7*33 1,5мкм (полностью пористый сорбент, но дешевле Platinum).
Аналиты различные пептиды, содержащие 2-9 аминокислотных остатков. Буфер 50 мМ KH2PO4 - ACN в различных соотношениях (от 2 до 35% ACN), T=45 градусов.
Прибор стандартный Shimadzu LC 20 Prominence c 12 мкл ячейкой детектора и капилярами на 0,005-0,007".
Наихудшие результаты по эффективности разделения показала колонка Chromolith HR C18 4.6*50, но давление в системе самое низкое. Даже если использовать колонку в 2 раза длиннее она не даст такой же эффективности и скорости анализа, как лучшая из 4 протестированных колонок. Самая дешевая колонка.
На предпоследнем месте по совокупности плюсов и минусов Grace VisionHT С18P 7*33 1,5мкм. Давление при F=2.75 мл/мин и около 20МПа, время анализа с градиентом 8-12 минут, изократика - 4-5 минут (в зависимости от пептидов в смеси). Очень достойный результат за свои деньги.
Kinetex C18 3*50mm 2.6мкм. Совсем недавно пришла, работаем на ней менее 2 недель. К сожалению, нет ячейки на 2,5 мкл, поэтому колонка может быть не раскрыла весь потенциал, но это самая быстрая колонка из всех (и самая дорогая). Время анализа 1,5-3 мин на изократике, 5-7 мин градиент (в зависимости от пептидов в смеси). Но по эффективности разделения уступает Grace Platinum Rocket 7*50 1,5мкм. Объем вкола пришлось уменьшить с 5-10 мкл до 0,5-1 мкл.
Наилучшую эффективность, но и наибольшее время анализа (5,5-7 мин на изократике, 10-13 мин градиент (в зависимости от пептидов в смеси)) показала Grace Platinum Rocket 7*50 1,5мкм. Это хорошая замена традиционных 4,6*150(250) мм колонок. У других производителей не встречал такой геометрии колонок, но для относительно старых систем это будет лучший выбор для сокращения времени анализа.
C_h_r_o_m_o
Пользователь
Ранг: 25


03.10.2012 // 13:15:25     
Спасибо огромное за пространный ответ. Попытаюсь разобраться и вникнуть. Если куплю и попробую - отпишусь!
Спасибо ещё раз.

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты