Форумы ANCHEM.RU: Интерфероны: определение сопутствующих белков методом ВЭЖХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Интерфероны: определение сопутствующих белков методом ВЭЖХ >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Интерфероны: определение сопутствующих белков методом ВЭЖХ

vetal1987
Пользователь
Ранг: 20

25.12.2012 // 19:09:23

Добрый день! Подскажите пожалуйста, кто работал с интерферонами! Имеется методика определения сопутствующих белков методом ВЭЖХ по монографии ЕР 7,0 Interferon alfa 2 concentrated solution. У меня колонка Symmetry300C18, 4.6×250 mm, 5µm, скорость потока 1,0 мл/мин, длина волны 210 нм.
Испытуемый раствор: 1 мг/мл белка. Пик выходит в районе 38 минуты.
Проблема возникает с раствором сравнения.
Приготовление: К объему испытуемого раствора (непонятно к какому объему???) добавляют такое количество 0,25 % Н2О2, чтобы его концентрация была 0,005% и оставляют на 1 час. Затем добавляют 12,5 мг L-метионина на каждый миллилитр раствора и опять оставляют на 1 час.
По идеи должен образоваться некий продукт окисления интерферона. И затем измеряют коэффициент разделения между этим продуктом и интерфероном.
НО ПРОБЛЕМА В ТОМ, ЧТО ПИКОВ НЕТ ВООБЩЕ!

Кто может подсказать причину этого, буду очень признателен.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

optima
Пользователь
Ранг: 322

26.12.2012 // 11:53:07

В принципе там все получается. Проверьте, не просроченная ли у вас перекись.
Увеличьте ее концентрацию и время инкубации.
Окисленный интерферон выходит небольшим двойным пиком на 0.9 по отношению к основному пику.

Annie
Пользователь
Ранг: 29

14.01.2013 // 17:39:52

optima пишет:
В принципе там все получается.

на какой колонке делали??

optima
Пользователь
Ранг: 322

14.01.2013 // 18:54:56

ZORBAX 300SB-C18 4.6х250 5 микрон

Novice
Пользователь
Ранг: 71

16.01.2013 // 10:37:45

optima пишет:
В принципе там все получается. Проверьте, не просроченная ли у вас перекись.
Увеличьте ее концентрацию и время инкубации.
Окисленный интерферон выходит небольшим двойным пиком на 0.9 по отношению к основному пику.

У меня в приведенной в фармакопее системе вообще ничего не выходит. Колонка как у Вас, один в один, новая. Выходит маленький пичек в самом начале и все. Причем что стандарт колю, что исследуемый образец.
Прям не знаю что думать.

optima
Пользователь
Ранг: 322

16.01.2013 // 12:25:51

Редактировано 1 раз(а)

Сколько образца вы наносите?
Еще проблема может быть в подготовке образца. Как вы его фильтруете? Нужны специальные фильтры, не сорбирующие белок - PVDF.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Аналитический центр ЗАО «РОСА»
Специализированный научно-аналитический центр в области аналитического контроля качества воды и других объектов окружающей среды.

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

16.01.2013 // 16:10:19

Чисто из интереса, а как соотношение пиков окисленной / восстановленной форм говорит о сопутсвующих белках? Нет, я понимаю это официальный метод, но все же в чем идея?

Тем более, что только в белках перекисью не окисляется. Навскидку: Met (1ox, 2ox); Trp (2ox); Cys (в -SS- и цистеиновую к-ту); -SS- хотя там надо по-жестче; если хлорид ионы есть, перекись всякую радикальщину иниициирует (типа, хлорирование тирозина в кольцо), да в общем мало-ли

optima
Пользователь
Ранг: 322

16.01.2013 // 16:52:01

Метод взят из ЕР. Там название метода related proteins. Фактически это видоизмененные формы интерферона. Окисляется там действительно метионин, если верить литературе)))
Сопутствующие белки проверяют на электрофорезе.


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты