Форумы ANCHEM.RU: Выделение и разделение триглицеридов методом ОФ ВЭЖХ-МС

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Выделение и разделение триглицеридов методом ОФ ВЭЖХ-МС >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Выделение и разделение триглицеридов методом ОФ ВЭЖХ-МС

Анна биохимик
Пользователь
Ранг: 4

27.04.2013 // 16:52:50

Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста.
Необходимо выделить из плазмы и разделить триацилглицеролы.
Экстракцию делала по методу Фолча (1мл плазмы: 10 мл хлороформа: 5 мл метанола), отмывала водой, слой хлороформа отбирала и высушивала. Растворяла и вкалывала в подвижной фазе (ацетонитрил и изопропанол). Идентификацию делали на масе с химической ионизацией. Вышло всего три (боле менее) пика и по массам на триглицериды совсем не похоже.
Возможно у меня не та пробоподготовка, или элюент не тот, помогите советом начинающему аналитику.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Олег
Пользователь
Ранг: 529

27.04.2013 // 17:32:49

Анна биохимик пишет:
Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста.
Необходимо выделить из плазмы и разделить триацилглицеролы.
Экстракцию делала по методу Фолча (1мл плазмы: 10 мл хлороформа: 5 мл метанола), отмывала водой, слой хлороформа отбирала и высушивала. Растворяла и вкалывала в подвижной фазе (ацетонитрил и изопропанол). Идентификацию делали на масе с химической ионизацией. Вышло всего три (боле менее) пика и по массам на триглицериды совсем не похоже.
Возможно у меня не та пробоподготовка, или элюент не тот, помогите советом начинающему аналитику.

Уважаемая, Аня! Для начала посмотрите через поисковик, который находится в начале странички "Поиск". Кое-что должно помочь...

Анна биохимик
Пользователь
Ранг: 4

27.04.2013 // 19:03:07

Уже вроде весь орум проштудировала, про пробоподготовку не нашла...
Не отрицаю, возможно плохо смотрела... Нашла тему про проблему идентификации пиков, но у нас такой проблемы нет, стандарты заказали. Правда еще не пришли..

kump
Пользователь
Ранг: 3203

27.04.2013 // 21:17:03

Редактировано 1 раз(а)

Может это не совсем по теме, но что-то помнится, что ОФ ВЭЖХ отличают подсолнечное масло от оливкового, которые по жирнокислотному составу практически одинаковы, а вот собственно триглицериды у них разные. Должны быть какие-то методики с пробоподготовкой в части ВЭЖХ.
Наберите в поисковике "ВЭЖХ триглицеридов растительных масел" кое-что вывалится.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

29.04.2013 // 9:28:36

Смесь Фолча - самое то для извлечения практически всех липидов. Единственно промывку осуществляют 0,5-0,8 % хлоридом калия. Но вполне можно воспользоваться твердофазной экстракцией, так сказать без определенного "геммороя" с использованием растворителей, чтобы избежать перекисного окисления. Проверить то что извлекаете можно для начала и ТСХ, проявляя 10 % фосфорномолибденкой. Покрашены будут только липиды., правда все и ди и три глицериды, ну и фосфолипиды

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

29.04.2013 // 14:37:28

Анна биохимик пишет:
Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста.
Необходимо выделить из плазмы и разделить триацилглицеролы.

1. Сделайте нормальный литобзор.

2. Если интересуют только ТАГи, то можно действительно Фолчем, но есть и другие методики экстрации, скажем, более оптимальные в этой ситуации. Затем экстракт необходимо "почистить" (ТФЭ/ТСХ), затем уж делать ОФ-ВЭЖХ-МС.

3. Насчет ВЭЖХ-МС. Стоит обратить внимание на выбор хроматографической системы (сорбент-элюент) и оптимизацию условий, т.к. качественный состав ТАГов плазмы крови человека относительно сложный, т.е. при неудачно выбранной (или неоптимизированной) хром. системе запросто получите N ТАГов в одной хроматографической полосе. В рамках просто ОФ-ВЭЖХ на Sil C18 (и т.д.) нереально разделить все ТАГи в данной ситуации, но можно значительно уменьшить количество ТАГов в итой хром. полосе.
Так же имеет смысл использовать +ESI (в форме [M+NH4]+ и т.д.) вместо +APCI, особенно, если используете колонки с ID<=2mm и не хватает чутья.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

КОРТЭК, ООО
Фирма ООО «КОРТЭК» разрабатывает, серийно производит и сопровождает в эксплуатации атомно-абсорбционные спектрометры КВАНТ.

Анна биохимик
Пользователь
Ранг: 4

30.04.2013 // 16:09:24

Спасибо большое за советы.
ТСХ делала, но фосфорномолибденовой не было под рукой, проявляла йодом. Как то неудачно получилось...
Давно хочу попробовать ТФЭ, тем более недавно приметила на работе эти самые картриджи для ТФЭ Watersorb, никогда ими не работала, поэтому не знаю с какой стороны к ним подойти... Написано С18.
И колонки у нас на ВЭЖХ все с С18, длина разная, и объем... но группа привита одна и та же.. В формате +ESI делали, ни пиков ни чего, а в +APCI вкололи вроде что-то отдаленно похоже, массы близки к ТАГам.
Прочитала, что можно их делить и ГХ-МС, но принципиально газ водород, начальство открестилось от меня, сказало что взорву я все. Никто не знает может и с гелием можно делить ТАГи?

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

30.04.2013 // 18:16:56

Редактировано 1 раз(а)

Посмотрите (например) здесь:
Bird et al Serum lipidomics profiling using LC-MS and high-energy collisional dissociation fragmentation: focus on triglyceride detection and characterization. Anal Chem. 2011 Sep 1;83(17):6648-57. doi: 10.1021/ac201195d. PMID:21774539

Это одна из многочисленных статей по ТАГам плазмы, не факт что лучшая, но вполне работающий метод и на редкость внятно написано. Вообще литературы по липидам плазмы ну просто океан, методы на все цвета и фасоны: что из них вы смотрели?

Посмотреть что у вас в образце можно на прямом вводе с ESI, там полетят в основном ТАГ (ацетат аммония не забудьте добавить только) и эфиры холестерина, потом PE и PC. ТАГи вы ни с чем не спутаете даже без МС/МС

Если в экстракте все хорошо, можно оптимизировать LC-MS.


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты