| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Количественное определение глюкозы в смеси с другими углеводами >>>
|
 |
| Автор | Тема: Количественное определение глюкозы в смеси с другими углеводами | ||
|
Viola Пользователь Ранг: 7 |
 03.10.2013 // 17:07:49
Редактировано 1 раз(а) Добрый день! Имеем следующее - необходимо определить содержание глюкозы в семенах пшеницы. Содержание редуцирующих сахаров в семенах пшеницы 0,1-0,3% (масс.) Первое, что попробовала- глюкометром One Touch Select. Так и не смогла подобрать подходящее разведение раствора. Все время пишет Error4. Теперь собственно вопрос: каким методом воспользоваться, чтобы найти наконец нужное разбавление? И получится ли вообще такое определение, все-таки это водный раствор, а не кровь? Пока как вариант имею разделение на ТСХ водного раствора муки (фильтровать/центрифугировать/осаждать?), либо о-толуидиновый метод, либо покупка набора типа Фотоглюкоза. Может еще какие-нибудь селективные методы подскажете?Реактивов пока ни для какого метода нет, все нужно заказывать. Поэтому жду ваших мнений - с какого метода начать, какой из них селективнее, и по поводу подготовки исходника (семян) тоже интересно что можете посоветовать (пока понятно, что нужно осаждать белки ТХУК, центрифугировать). P.S. из приборов доступен ФЭК |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
chem4690 Пользователь Ранг: 132 |
03.10.2013 // 17:40:14
Ппоробуйте проверить Ваш глюкометр на контрольных растворах глюкозы с концентрацией от 0,05% до 0,3%. Впрочем, не уверен, что данный прибор Вам поможет, поскольку стандартная ошибка глюкометров 20% и откалиброваны они по плазме крови, а у Вас матрица другая, соответственно и ОВР потенциал другой. Даже если получится на контрольных, скорее всего, нужно не разбавлять, а концентрировать пробу, что в Вашем случае затруднительно. ТСХ уж очень неколичественный метод, насчет остальных ничего сказать не могу. Сами измеряем фотометрически по реакции с динитросалициловой кислотой. |
||
|
Viola Пользователь Ранг: 7 |
03.10.2013 // 17:44:53
Спасибо Вам за ответ. ТСХ исключу из списка. А по поводу метода с динитросалициловой кислотой - у Вас смесь углеводов или только глюкоза? Как у этого метода с селективностью по глюкозе? |
||
|
chem4690 Пользователь Ранг: 132 |
03.10.2013 // 17:55:58
Редактировано 2 раз(а) У Вас какие сахара могут быть? Нередуцирующие сахара не мешают. Вам нужно знать точное содержание именно фруктозы? Или содержание ред. сахаров? Когда готовите экстракт, не грейте, используйте холодный дистиллят и перемешивание (не менее 1 ч). В горячей воде сахара могут из крахмала поползти. |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
03.10.2013 // 18:08:00
Редактировано 1 раз(а) Ну вот уж насчет ТСХ с предыдущим постом не согласен. Как раз метод достаточно селективен и количество глюкозы после проявления тимоловым проявителем легко посчитать относительно стандарта с помощью планшетного сканера и программы типа "Сорбфил-Видеоденситометр", можно моей ТСХ-Менеджера 4.01, ЛенХром или АннаИса. Единственно необходимо соблюдать линейность при нанесении веществ. В виду особенностей детектирования и отражения света в тонком слое этот процесс подвержен закону Кубелки-Мунка и является нелинейным. Поэтому участок концентраций, которые можно считать попадают в линейную часть калибровки - от 1 мкг до 10 мкг в пятне. На мой взгляд менее опасный метод - это ферментативный. Покупаете набор по определению глюкозы в крови для клинико-диагностических лабораторий и определяете  . Можно попроситься к знакомым в КДЛ и сделать анализы Ваших экстрактов на Эксане (анализатор глюкозы с иммобилизованой глюкооксидазой). о-толуидиновый метод тоже хорош и селективен, но токсичен.Что касается пробоподготовки, то таки да, белки необходимо будет осадить либо 5 % ТХУ, либо рекативом Карреза. Ну и еще ВЭЖХ на аминофазе тоже замечательно, если конечно есть на чем его реализовать |
||
|
Viola Пользователь Ранг: 7 |
03.10.2013 // 19:03:43
chem4690, у меня в смеси получатся декстрины различных молекулярных масс, фруктоза, глюкоза, пентозаны. Мне очень нужно получить содержание только глюкозы |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Viola Пользователь Ранг: 7 |
03.10.2013 // 19:06:17
Спасибо и Вам за ответ. Прихожу к выводу, что наиболее доступный метод - набор для КДЛ))) Можете посоветовать какой-нибудь удобный, проверенный? |
||
|
kot Пользователь Ранг: 2028 |
04.10.2013 // 6:13:23
Как вариант. Заточен как как раз на пищевку Но я за ВЭЖХ, как то однозначнее |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
04.10.2013 // 9:54:44
На вскидку не скажу как он называется, тем более что у Вас в России этот набор может иметь иное название. У нас на Украине эти наборы для КДЛ производит Фелисит и называется он просто - "Набор для определения глюкозы в крови ферментативным методом". В нем буфер, раствор хромогена и раствор глюкооксидазы. При такой смеси как у Вас я бы выбрал ТСХ (метод из европейской фармакопеи, могу посмотреть в украинской. Он там был.). Тем более, что реализуется он просто. Экстракцию сахаров из обезжиренной гексаном муки, я бы проводил не водой, а 50% - 60% этанолом или метанолом (это в случае ТСХ) , добавил бы 5% ТХУ (объем зависит от объема экстракта), отцентрифугировал (или отфильтровал). Затем нанес бы на ТСХ стандарт глюкозы и пробы в количестве исходя из соображений ( 6-9 мкг глюкозы в точке нанесения). Поместил бы в камеру с фармакопейной ПФ, затем высушил бы пластинку, опрыскал тимоловым проявителем (спиртовый раствор тимола с серной кислотой), нагрел. На белом фоне обнаружил бы пятна цветом от красных (фруктоза и фруктозосодержащие) до фиолетовых (глюкоза, гексозы). Отсканировал бы на сканере. Скачал бы из инета с Molbiol.ru Сорбфил - Видеоденситометр, обработал бы полученную ТСХ хроматограммку (вернее ее скан) и получил бы количественное содержание именно глюкозы. (Благо стандарты глюкозы, фруктозы и сахарозы - не проблема). |
||
|
chem4690 Пользователь Ранг: 132 |
04.10.2013 // 11:05:43
Вот это сюрприз. Garry, а почему Вы конкурентов своих советуете?  Или Вы свой проект закрыли? |
||
|
chem4690 Пользователь Ранг: 132 |
04.10.2013 // 11:36:14
При такой смеси как у Вас я бы выбрал ТСХ (метод из европейской фармакопеи, могу посмотреть в украинской. Он там был.). Тем более, что реализуется он просто. Экстракцию сахаров из обезжиренной гексаном муки, я бы проводил не водой, а 50% - 60% этанолом или метанолом (это в случае ТСХ) , добавил бы 5% ТХУ (объем зависит от объема экстракта), отцентрифугировал (или отфильтровал). Затем нанес бы на ТСХ стандарт глюкозы и пробы в количестве исходя из соображений ( 6-9 мкг глюкозы в точке нанесения). Поместил бы в камеру с фармакопейной ПФ, затем высушил бы пластинку, опрыскал тимоловым проявителем (спиртовый раствор тимола с серной кислотой), нагрел. На белом фоне обнаружил бы пятна цветом от красных (фруктоза и фруктозосодержащие) до фиолетовых (глюкоза, гексозы). Может Вас не затруднит и номер методики озвучить? Есть ли она в открытом доступе? |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 22
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
