| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Проблема с определением антибиотиков в молоке методом ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Проблема с определением антибиотиков в молоке методом ВЭЖХ | |||||
|
Zykov Пользователь Ранг: 34 |
 03.10.2014 // 15:49:15
Редактировано 1 раз(а) Всем привет! Проблема в следующем: Система Agilent infinity 1290. Определяем антибиотики сульфаметазин и сульфацетамид, снимаем данные в режиме MRM, т.е. чувствительность бешеная. Подвижная фаза вода-ацетонитрил 9:1 с последующим градиентом. Проблема в том, что после нескольких заколов антибиотиков, они где-то глубоко засели. Колим дис. воду и получаем отличную хроматограмму остаточного содержания антибиотиков , время удерживания при этом сохраняется, но нет воспроизводимости по площади (то больше то меньше). То есть понятно, что засели они не в колонке. Все возможные аппаратные методы промывки (purge quat. pump, needle wash autosampler) применяли, но ничего не помогает. Хочется понять где антибиотики могут сидеть и как от них избавиться. При рутинных анализах на антибиотики не будешь же после каждого закола что-то разбирать и чистить. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Zykov Пользователь Ранг: 34 |
03.10.2014 // 16:48:56
Немного удалось пообщаться с одним хроматографистом практиком. По его мнению для анализа антибиотиков необходимо использовать специальную не стальную иглу (какую-то стеклянную), ибо на стальную эти антибиотики и садятся. Первый раз такое слышал вообще. Капилляр от автосамплера до колонки насколько я понимаю тоже стальной, в чем смыл тогда стеклянной иглы - все будет садиться в капилляре. Короче говоря непонятки вообще. |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
03.10.2014 // 17:03:10
Редактировано 2 раз(а) Уважаемый, фиговая сходимость площадей пиков - суть не шаманства с иглами автосамплеров, а суть работы самого автосамплера. Ну что с того, что Вы замените иглу автосамплера на стеклянную или на сапфировую... а далее у Вас металлических коммуникаций- хоть пруд-пруди. Например сам инжекционный блок с петлей, тело колонки и т.д.. Так что хроматографист-практик мягко говоря неправ. Ищите причины отсутствия сходимости в работе автосамплера (возможно утечки при инжекции, забитая игла отстатками септ виал...), возможно потерь при детектировании в случае ESI (но у Вас я так понимаю, другой принцип). |
|||||
|
Zykov Пользователь Ранг: 34 |
04.10.2014 // 9:03:28
Суть проблемы не в отсутствии воспроизводимости, а в том что при вколе дистиллированной воды у нас выходят пики антибиотиков. То есть они где-то в системе ввода пробы сидят и при вколе частично вымываются. Естественно воспроизводимости при этом не будет. |
|||||
|
Zykov Пользователь Ранг: 34 |
04.10.2014 // 9:04:09
Задача избавиться от антибиотиков в системе. |
|||||
|
IvanStyskin Пользователь Ранг: 149 |
04.10.2014 // 13:29:51
Ну мыть, промывать... Какой Вы совет еще хотите услышать. С трубочками этими мелкими аджилентовскими тем более это сложно, диаметр малый. Промывайте пока при заколе подвижной фазы не будет ровной базовой линии. И методика видимо несильно хорошая. Дорабатывайте. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
04.10.2014 // 15:45:24
Редактировано 1 раз(а) 1. Оптимизировать состав промывочной жидкости АС (например, просто вода здесь не подойдет). Оптимизировать процедуру промывки АС перед/после инжекции. 2. Оптимизировать состав элюента. 3. Обратите внимание на режим работы АС - после инжекции поток не должен переключаться, т.е. элюент должен проходить через петлю и иглу. |
|||||
|
Kalambet Пользователь Ранг: 484 |
04.10.2014 // 23:48:31
А как вам такая идея: вообще-то далеко не все равно, в чем растворена проба. Холостой вкол должен содержать не дистиллят, а элюент начального состава. Если вкалывается дистиллят, он меняет условия сорбции антибиотиков и они смываются со стенок. Если хочется избавиться - мыть надо дистиллятом, но если в холостом с начальным буфером пиков нет, то и не надо мыть - и так хорошо. Только не растворять пробу в дистилляте. |
|||||
|
TCDD Пользователь Ранг: 16 |
05.10.2014 // 2:22:35
Редактировано 1 раз(а) Если по Вашему мнению проблема в системе ввода, то я посоветовал бы проинспектировать состояние уплотнителя ротора клапана ввода (5068-0007 Injection valve rotor seal), это деталька из веспела/графита в которой собственно проточены каналы, по которым движется ПФ, находящаяся в клапане и протекающая либо в mainpass либо в bypass. Ресурс заявленный производителем на эту часть ротора - 2000 переключений туда-сюда. Потом каналы эти начинают раздалбываться и в принципе я не исключаю вероятности образования некоего "кармана", в котором может застаиваться то, что приходит сюда с иглы/петли (канал удлиняется и его край выходит за пределы выходного отверстия, ведущего от клапана к колонке). Ради эксперимента можете попробовать временно переставить на место ротора клапана автодозатора ротор клапана из термостата колонок (как правило им пользуются гораздо реже и его кондиция гораздо лучше),(соответственно пустив поток на колонку и из колонки напрямую). Конечно версия несколько надуманная, но кто знает, вдруг поможет. У нас в лабе были некоторые проблемы с этой деталью (воспроизводимость пиков ухудшалась), заказали пару новых. |
|||||
|
Zykov Пользователь Ранг: 34 |
06.10.2014 // 10:05:10
Фух, вроде отмылся! Погонял вручную подвижную фазу через bypass и mainpass, а также прогнал слабый раствор ПАВа (амфоацетата) через систему. Вроде все норм стало. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
06.10.2014 // 11:13:10
Ждем новую тему по отмывке  В SCAN лучше не ходите. Незнание - это блаженство Хотя может и повезло...
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 10 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
