Форумы ANCHEM.RU: Методика синтеза реагента из цистеина и динитрофенилсульфохлорида

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Методика синтеза реагента из цистеина и динитрофенилсульфохлорида >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Методика синтеза реагента из цистеина и динитрофенилсульфохлорида

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

02.03.2006 // 17:07:44

Для методики нужен хитрый реагент - дериват цистеина по азоту, продукт присоединения динитрофенилсульфохлорида. Поделитесь, пожалуйста, вариантами методик или просто мыслями. Интересно также посмотреть методики дансилирования (на память не помню, а e-library прикрыли). Спасибо!

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

03.03.2006 // 4:46:53

КонстантинС пишет:

Для методики нужен хитрый реагент - дериват цистеина по азоту, продукт присоединения динитрофенилсульфохлорида. Поделитесь, пожалуйста, вариантами методик или просто мыслями. Интересно также посмотреть методики дансилирования (на память не помню, а e-library прикрыли). Спасибо!

К сожалению, могу поделиться только самыми общими соображениями. Сперва надо защитить -SH группу цистеина. Для этого в настоящее время есть много реагентов, достаточно посмотреть любую книжку по синтезу пептидов. К примеру:
www.biochemj.org/bj/179/0127/1790127.pdf
Сюда же относятся 3-нитро-2-пиридинсульфенил (Npys), т-бутилсульфенил (StBu) и другие (я в этом не специалист). Затем провести реакцию с динитрофенилсульфохлоридом. По аналогии с дансилхлоридом, есть несколько вариантов. Самый простой - водный раствор защищенного цистеина забуферивается до pH=10.8 (обычно, карбонатным буфером) и добавляется раствор сульфохлорида в ацетоне, перемешивается, греется при 60С полчаса или оставляется на ночь при комнатной температуре(возможны варианты с реакцией при комнатной температуре в присутствии Тритона-Х100, для фенолов есть еще более экзотичесие подходы). Полученное производное можно проэкстрагировать в хлороформ. Остается снять защиту.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

03.03.2006 // 15:03:03

Спасибо, Евгений!

Становится ясно, что надо реагент все-таки заказывать...

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

03.03.2006 // 15:37:14

Редактировано 1 раз(а)

Вообще-то я упустил самый простой вариант - в качестве защиты окислить до цистина (или начать с него), дериватизировать по аминогруппам, а затем восстановить до тиола , допустим, тиогликолевой кислотой, трибутилфосфином или трис-карбоксиэтилфосфином. С утра мозги лучше работают.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

06.03.2006 // 15:09:37

Дааа... но все равно, результат не гарантирован...

Видишь ли, надо поделить очень малые кол-ва аминокислот (на энантиомеры). Бутирилцистеина, конечно же, нет, заказывать долго.

Есть идея дериватизнуть (есть фмок и фитц), а дальше лигандообменной на ВЭЖХ-ФЛД или электрофорез-УФ... смесь вроде не страшная, аминокислот пять-шесть наблюдается... К сожалению, Даванков в отпуске заграничном, может, у тебя завалялись какие-нибудь обзорчики?

Есть новенькая перметилированная циклодекстриновая газовая колонка, может, на ней что-то получится после дериватизации? Или при нужной температуре все просто рацемизуется?

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

06.03.2006 // 18:31:17

Редактировано 1 раз(а)

ФМОК-производные люди делят, но не встречал, чтобы лигандообменной хроматографией:
www.astecusa.com/publications/presentations/49.PPT
Лигандообменным электрофорезом люди делили дансил и НБД призводные:
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=12924564&query_hl=3&itool=pubmed_docsum
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=15675519&query_hl=3&itool=pubmed_docsum
В ГХ на циклодекстринах тоже можно делить некоторые производные аминокислот, но у меня сомнение, что перметилированная фаза для этого пригодна.
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=15865174&query_hl=6&itool=pubmed_docsum
Согласно каталогу фирмы Astec, для этих целей подходит бутирил-циклодекстрановая фаза (Chiraldex G-BP), дериватизация - N-TFA O-Me:
www.chromspec.com/pdf/lit/chiraldex-HB.pdf
Если нет подходящих хиральных колонок для ВЭЖХ, то у Флюки неплохой выбор хиральных реактивов для дериватизации:
www.sigmaaldrich.com/img/assets/4242/fl_analytix3_2002_new_.pdf (в конце).
Но они дороги. При большом объеме работ лучше разжиться подходящей колонкой.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательный лабораторный центр ЦГЭ Москвы
ИЛЦ аккредитован в «Системе аккредитации лабораторий, осуществляющих санитарно-эпидемиологические исследования, испытания».

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

09.03.2006 // 18:33:22

Спасибо, Евгений!

Буду ловить aspartic acid (низкие концентрации, в образце много гадости): очистка на нейтральном сверхсшитом, концентрирование на анионообменнике из щелочной среды, ФМОК-дериватизация, разделение на Хиробиотике. Как по-твоему?

Молюсь, что она прилично отличается от других аминокислот по свойствам, и другие ее не перехлестнут. А если уж перехлестнут, придется мучаться с ДНС и электрофорезом..

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

10.03.2006 // 4:48:15

КонстантинС пишет:

Спасибо, Евгений!

Не за что.

КонстантинС пишет:

Как по-твоему?

Пока не попробуешь, не узнаешь...


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты