Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: проблема >>>

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ: проблема
Avet
Пользователь
Ранг: 800

24.07.2017 // 9:49:00     
Уважаемые коллеги ВЭЖХ-специалисты! Возникла проблема, по которой хочу посоветоваться.
ОФ -ВЭЖХ, разделение и количественное определение некоторых компонентов природного происхождения из лекарственного растительного сырья. Проблема: после ряда анализов эффективность падает (до 25%), привести сорбент "в чувство" до какого-то момента удавалось промывкой с последующим выдерживанием в 100% ацетонитриле. Однако интервалы между некобходимостью такой очистки стали все меньше, и дошли до двух анализов, и результат такой очистки все хуже и хуже. Если в начале эксплуатации колонки было достаточно промывки раз в месяц в течение часа, сейчас - раз в неделю в течение 6 часов
Растворителем для образца является 50% этанол.
Матрицей, кроме букета компонентов растительного сырья, являются еще ВМС из лекарственной формы.
Советуюсь: что можно еще предпринять?
Заранее благодарю откликнувшихся.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Шушечка
Пользователь
Ранг: 405


24.07.2017 // 12:46:12     
так может растворитель более селективный подобрать? или пробоподготовку каким то образом скорректировать?
из Вами описанной проблемы я пока ничего не увидела)))
Avet
Пользователь
Ранг: 800


24.07.2017 // 13:06:45     

Шушечка пишет:
так может растворитель более селективный подобрать? или пробоподготовку каким то образом скорректировать?
из Вами описанной проблемы я пока ничего не увидела)))

Благодарю, что отозвались. Проподготовку корректировать нет возможности, так как методика валидирована, и вносить в нее изменения - сами понимаете, ревалидация. Вот растворитель для процедуры очистки колонки и пытаемся найти, но пока не получается. Поэтому и обратился на форум, может у кого-то есть опыт в подобном вопросе.
лот
Пользователь
Ранг: 1134


24.07.2017 // 13:22:29     
Редактировано 2 раз(а)


Avet пишет:

Матрицей, кроме букета компонентов растительного сырья, являются еще ВМС из лекарственной формы.

Возможно как раз эти ВМС, сорбируясь, и сажают Вам колонку? Может что-то знаете об их природе, в чём они хорошо должны растворятся и этим помыть?
У нас такая же не отмываемая "посадка" колонок встречается, т.к. пробы у нас могут содержать ( и иногда содержат!)непредсказуемые примеси. Иногда колонка садится за один ввод. Приходится менять колонки, всегда лежат запасные.
Вам сложнее, так как зажаты условиями методики и, если это действительно "работа" ВМС, возможны постоянные рецидивы с посадкой колонки.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1280


24.07.2017 // 13:59:43     
Редактировано 1 раз(а)

Методика - дерьмо, но ... "валидирована"
Ну хотя бы предколонку поставьте и меняйте почаще. Или тоже - "низзя!"?
Critic
Пользователь
Ранг: 78


24.07.2017 // 14:02:36     
Вариант 1
Возможно, процедура промыва выполняется неправильно чисто технически (открыть/закрыть какие-то клапаны в ЖХ системе, величина потока по колонки, режим ее набора). Еще часто в подобных случаях используют промежуточный растворитель для перехода с фазы на обмыв. т.е. фаза -> промежуточный р-ль -> р-ль для промыва.
Ищите информацию в документации к прибору или спрашивайте у продавцов оборудования.

Вариант 2
можно поиграть с температурой во время промывки колонки (как правило, повышать - в разумных пределах, естественно).

-------
предколонка +1 если что-то выпадает в осадок, то в первую очередь произойдет именно там.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Спектрофлуориметр CM 2203 Спектрофлуориметр CM 2203
Полностью управляемый от компьютера спектрофлуориметр для ультрафиолетовой и видимой области спектра, обеспечивающий высокочувствительные и стабильные измерения спектров возбуждения, испускания, синхронных, поляризации, температурных, квантового выхода, поглощения жидких и твёрдых образцо
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Avet
Пользователь
Ранг: 800


24.07.2017 // 20:08:57     
Редактировано 1 раз(а)


Волгин пишет:
Методика - дерьмо, но ... "валидирована"
Ну хотя бы предколонку поставьте и меняйте почаще. Или тоже - "низзя!"?

Уважаемый г-н Волгин! Методика, к сожалению, такова, какова она есть. В процессе валидации указанные проблемы могли не появиться. Валидация проводится сколько? Ну две-три недели максимум. Проблемы же появились при длительной эксплуатации колонки.
Новая колонка имела число теоретических тарелок ≈ 15000 (без предколонки 17000, т.е. предколонка «съедает» 2000). После 2-х лет эксплуатации колонки N–plates=13000. Колонка обеспечивает допустимое разрешение 1,5 между критичной парой пиков до 10000 N-plates. Т.е. 10000 - это уже нижняя допустимая граница.
Для информации: Колонка Inertsil Ph 250 х 4,6 мм, размер частиц 5 мкм, GL Sciences™ Inc. (Япония) с предколонкой.
Колонка стремительно теряет разрешающую способность: неделю назад шестичасовая обратная промывка 100 % ACN дала всего 13000 N-plates, за четыре рабочих дня N-plates упало до предельного уровня 10000. Т.е. падать дальше некуда. Поэтому и выхожу на форум, чтобы узнать мнение многочисленных профессиональных, опытных ВЭЖХ-специалистов. Вас считаю одним из "гуру".
Avet
Пользователь
Ранг: 800


24.07.2017 // 20:15:13     

Critic пишет:
Вариант 1
Возможно, процедура промыва выполняется неправильно чисто технически (открыть/закрыть какие-то клапаны в ЖХ системе, величина потока по колонки, режим ее набора). Еще часто в подобных случаях используют промежуточный растворитель для перехода с фазы на обмыв. т.е. фаза -> промежуточный р-ль -> р-ль для промыва.
Ищите информацию в документации к прибору или спрашивайте у продавцов оборудования.

Вариант 2
можно поиграть с температурой во время промывки колонки (как правило, повышать - в разумных пределах, естественно).

-------
предколонка +1 если что-то выпадает в осадок, то в первую очередь произойдет именно там.

Уважаемый Critic! Если Вас не затруднит, посмотрите мой ответ г-ну Волгину, там детально описана ситуация, которая уже довольно критическая. С самой процедурой промывки ошибки нет - все верно. А вот температура как одна из идей - это интересно. Постараемся воспользоваться.
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1083


24.07.2017 // 22:08:38     

Avet пишет:...

Брошу 5 копеек..
1. Обязательно использовать предколонку.
2. Поскольку промывка чистым ACN к успеху не привела, очевидно на колонке сидят водорастворимые ВМС(???) и, следовательно промывать от них следует 5-10% водным ACN при повышенной температуре с последующим градиентом до рабочего элюента.
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 297


25.07.2017 // 4:22:48     

OldBrave пишет:

Avet пишет:...

Брошу 5 копеек..
1. Обязательно использовать предколонку.
2. Поскольку промывка чистым ACN к успеху не привела, очевидно на колонке сидят водорастворимые ВМС(???) и, следовательно промывать от них следует 5-10% водным ACN при повышенной температуре с последующим градиентом до рабочего элюента.

А что за ВМС у вас? Попробуйте промыть ацетонитрилом/водой с 0,05 или 0,1% трифторуксусной к-той градиентом с 5-10% ацетонитрила до 100 и обратно 2-3 раза, потом отмойте от кислой ПФ и проверьте.
Шушечка
Пользователь
Ранг: 405


25.07.2017 // 6:17:00     

Волгин пишет:
Методика - дерьмо, но ... "валидирована"
Ну хотя бы предколонку поставьте и меняйте почаще. Или тоже - "низзя!"?

поддержу!!!!

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты