Форумы ANCHEM.RU: Техника гельпроникающей хроматографии

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Техника гельпроникающей хроматографии >>>

  Ответов в этой теме: 19
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Техника гельпроникающей хроматографии

Наташа
Пользователь
Ранг: 33

14.01.2004 // 12:27:13

Здравствуйте.
Впервые столкнулась с необходимостью практического применения гельпроникающей хроматографии, поэтому появились различные вопросы, связанные именно с тем, как проводить работу руками. Можно ли в какой-либо литературе найти ответы на следующие вопросы:
1. Каким образом выбирается низкомолекулярный маркер для колонки? Так как с высокомолекулярным все определились (голубой декстран), то по низкомолекулярному маркеру есть различные данные, и притом используются такие соединения, которых нет в продаже.
2. Какие именно концентрации калибровочных декстранов и в каких количествах готовить?
3. В каком количестве наносить калибровочные растворы и определяемое вещество для определения ММ распределения?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

14.01.2004 // 15:43:45

Смотря какая колонка (или набор колонок), какие массы нужно откалибровать. В качестве ММ полного проницания легко подойдет ацетон.
Концентрации зависят от ММ и типа детектора, диаметра и длины системы колонок, чем более высокое ММ, тем меньше концентрация в стандарте.
Потом, гель-хроматография, скорее хроматография размеров молекул, а не ММ. Поэтому, что собираешься определять, тем и калибруешь.
В вопросе слишком мало конкретики, чтоб нормально на него ответить.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

14.01.2004 // 15:49:03

Наташа пишет:
Можно ли в какой-либо литературе найти ответы на следующие вопросы:

Легко.
1. Стыскин Е. Л., Ициксон Л. Б., Брауде Е. В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986.
2. Остерман Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.
Наверно, что-то и посвежее есть. Но и этого за глаза. Другое дело, что есть "веревки", о которых не пишут в книгах.

Наташа
Пользователь
Ранг: 33

14.01.2004 // 16:41:49

Serga пишет:
В вопросе слишком мало конкретики, чтоб нормально на него ответить.

А что именно нужно конкретизировать?

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

14.01.2004 // 17:09:18

Наташа пишет:
А что именно нужно конкретизировать?

1. Что собираетесь делить (белки, полисахариды, ДНК-овые праймеры, плазмиды и т.д.) и откуда.
2. На чем собираетесь делить (TSK-гель для ВЭЖХ или аналогичные и какие размеры, или сами заполняете колонки 60-90 см (какого диаметра?) (Sephadex, Sephacryl, Sepharose или иное?)
3. Чем собираетесь детектировать?

Наташа
Пользователь
Ранг: 33

14.01.2004 // 17:22:39

Редактировано 2 раз(а)

Serga пишет:

Наташа пишет:
А что именно нужно конкретизировать?
1. Что собираетесь делить (белки, полисахариды, ДНК-овые праймеры, плазмиды и т.д.) и откуда.

Полиэтиленликоль из водного раствора

2. На чем собираетесь делить (TSK-гель для ВЭЖХ или аналогичные и какие размеры, или сами заполняете колонки 60-90 см (какого диаметра?) (Sephadex, Sephacryl, Sepharose или иное?)

Колонки заполнять сами Sephadex G-75

3. Чем собираетесь детектировать?

Скорее всего УФ

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Лабораторная водяная многоместная баня UT-4300
Обеспечивают поддержание заданной температуры водной среды. Применяются для нагрева и термостатирования колб, пробирок, стаканов и другой лабораторной посуды. Используются в различных областях медицины, научной и производственной сферах.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Наташа
Пользователь
Ранг: 33

14.01.2004 // 17:25:31

Serga пишет:

Наташа пишет:
Можно ли в какой-либо литературе найти ответы на следующие вопросы:
Легко.
1. Стыскин Е. Л., Ициксон Л. Б., Брауде Е. В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986.
2. Остерман Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.
Наверно, что-то и посвежее есть. Но и этого за глаза. Другое дело, что есть "веревки", о которых не пишут в книгах.

Спасибо за литературу

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

15.01.2004 // 15:15:34

Здравствуйте, Наташа!

Конечно, для ответа на Ваши первые вопросы надо написать мальнькую книжку

Сначала действительно почитайте, что есть, чем, говорится, богаты.
Я просто хотел заметить, что ПЭГ из воды неоптимально делить методом гель-фильтрации на Сефадексе - долго, муторно, черезвычайно неэффективно, особенно при заполнении вручную.
Если речь бы шла об аналитике - я бы сказал - анализируйте обращенно-фазовой хроматографией, а не гель-фильтрацией, градуируйте по стандартам ПЭГ (они дорогие, но легко приобретаемые).
Но если Вам нужно наработать препаративно - это другой вопрос.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

15.01.2004 // 15:59:22

Наташа пишет:
Полиэтиленликоль из водного раствора
Колонки заполнять сами Sephadex G-75
Скорее всего УФ

Действительно, муторно будет. Но первым делом, УФ-не подойдет, ничего не увидите. Абсолютно. Нужен рефрактометр, как минимум. (как максимум- ELSD)/Sephadex 75 даст один широкий пик, у которого можно будет только рассчитать ММР. Да и то, маловероятно. Убейте меня, но я так ничего и не понял. Нарабатывать ПЭГи с узким ММР, что ли?
Объясните таинственный смысл задачи.

Наташа
Пользователь
Ранг: 33

16.01.2004 // 9:26:11

Редактировано 2 раз(а)

Serga пишет:

Наташа пишет:
Полиэтиленликоль из водного раствора
Колонки заполнять сами Sephadex G-75
Скорее всего УФ
Действительно, муторно будет. Но первым делом, УФ-не подойдет, ничего не увидите. Абсолютно. Нужен рефрактометр, как минимум. (как максимум- ELSD)/Sephadex 75 даст один широкий пик, у которого можно будет только рассчитать ММР. Да и то, маловероятно. Убейте меня, но я так ничего и не понял. Нарабатывать ПЭГи с узким ММР, что ли?
Объясните таинственный смысл задачи.

Простите, что сразу его не объяснила.
В лекарственном препарате инфузионного действия как один из компонентов используется полиэтиленгликоль 20000, в нормативную документацию для этого препарата необходимо внести определение молекулярной массы, а при разработке показать молекулярно-массовое распределение ПЭГ. Соответсвенно, что бы внести в ФС определение молекулярной массы с использованием вискозиметрии (что предпочтительнее для рутинного анализа, чем хроматография) необходимо сделать определение Мм м ММ распределения абсолютными методами. Наиболее близкий к нам это гельпроникающая хроматография. Т. к. для препарата в состав которого входил желатин, нам ее делали. Сейчас начальство решило, что очень просто самим определять Мм этим способом.
Почему УФ - есть способ количественного определения ПЭГ с использованием Спектрофотометрии, сложность заключается только в том, что каждую пробу надо будет подготавливать

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

16.01.2004 // 10:24:32

Вот в этом и вся какава. Сделать ММР на Сефадексе можно, но систему нужно предварительно откалибровать, желательно стандартами ПЭГа с узким ММР. Как это сделать без рефрактометра- не знаю. Если только отбирать каждую фракцию, через модификацию и на УФ? И кроме ПЭГ-20М в пробе ничего.


Ответов в этой теме: 19 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты