Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

аминокислоты ГХ-МС >>>

  Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: аминокислоты ГХ-МС
alexsto
Пользователь
Ранг: 3

13.12.2018 // 10:17:37     
здравствуйте, с амнокислотами я столкнулась недавно, но опробовала кучу методик для силилирования и анализа свободных АК. Со связанными возникли проблемы: все идет хорошо до гидролиза с HCl. После того как высушиваем гидролизат и добавляем силилянт, ни одной кислоты не выходит на хроматограмме, даже внутренний стандарт. В чем дело, что не так, нужно ли предварительно изменить pH до силилирования?
Также меня интересует еще 2 вопроса:
1 зачем нужно запаивать ампулы для гидролиза с 6н НСl, нельзя провести его в пробирке на песчаной бане, например? Ведь с щелочным г-зом именно так и делают...
2. работаю с природными объектами и часто сталкиваюсь с изомерами АК в хроматограмме (определяются как АК по спектру масс), которые выходят в совсем других местах, чем стандарты, отсюда возникают сложности с мат. обсчетом. Как считать такие кислоты?
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
alexsto
Пользователь
Ранг: 3


18.12.2018 // 6:43:04     
ну неужели никто не знает ответов?
Олег
Пользователь
Ранг: 513


18.12.2018 // 8:00:38     

alexsto пишет:
здравствуйте, с амнокислотами я столкнулась недавно, но опробовала кучу методик для силилирования и анализа свободных АК. Со связанными возникли проблемы: все идет хорошо до гидролиза с HCl. После того как высушиваем гидролизат и добавляем силилянт, ни одной кислоты не выходит на хроматограмме, даже внутренний стандарт. В чем дело, что не так, нужно ли предварительно изменить pH до силилирования?
Возможно Вы недосушили. Попробуйте сушить в вакууме водоструйника при прогреве колбы до 60-70 град или отогнать азеотроп с хлористым метиленом. Можно и два-три раза.
А чем силилируете?
В инете есть обзоры по дериватизации аминокислот. Zaikin, например. Есть стандартные рецепты от производителей. Поищите.
Также меня интересует еще 2 вопроса:
1 зачем нужно запаивать ампулы для гидролиза с 6Н НСl, нельзя провести его в пробирке на песчаной бане, например? Ведь с щелочным г-зом именно так и делают...
Запаивают для сохранения аминокислот от разрушения. Есть методики и без запаивания. Все зависит от ожидаемых результатов.
В том же обзоре Заикина упоминается и о изменении некоторых аминокислот и появлении дериватов уже других аминокислот.
Успехов!
alexsto
Пользователь
Ранг: 3


10.01.2019 // 8:02:08     
Здравствуйте, спасибо за ответ!

Олег пишет:
Возможно Вы недосушили. Попробуйте сушить в вакууме водоструйника при прогреве колбы до 60-70 град или отогнать азеотроп с хлористым метиленом. Можно и два-три раза.
А чем силилируете?

Сушим хорошо: сначала под вакуумом, а затем оставляем под открытым воздухом несколько суток. На стенках пробирки остается налет кристаллический. Я заметила, что при добавлении силилянта этот налет не растворяется даже после нагревания. Может в этом дело...
Силилянт - BSTFA(TMCS 1%), также использовали просто BSTFA - тоже хорошо силилирует. Литобзор провела обширный - это стандартные реагенты.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 958


10.01.2019 // 10:08:45     
А чем силилируете?
Какой используете растворитель?
Вы описали типовую ошибку. Перед добавлением силилирующего агента, убедитесь, что все растворилось. Используйте ультразвук и правильный растворитель. Не плохо идет силилирование в абс. Py, но нужно все растворить, - потребуются усилия и время.

vmu
Пользователь
Ранг: 257


10.01.2019 // 12:58:19     

alexsto пишет:
опробовала кучу методик для силилирования и анализа свободных АК. Со связанными возникли проблемы: все идет хорошо до гидролиза с HCl. После того как высушиваем гидролизат и добавляем силилянт, ни одной кислоты не выходит на хроматограмме, даже внутренний стандарт.
Т.е., с модельными/стандартными растворами отдельных аминокислот или их смесей дериватизация идет нормально, пики на хроматограммах имеются? Как готовите стандартные растворы? Готовите из навесок раствор в воде (или в 0.1М HCl? или ...?) - упариваете его аликвоту досуха - добавляете BSTFA? Тут-то всё растворяется при добавлении реагента? Гидролизат белка тоже должен растворяться (но может и не полностью, тогда надо раствор центрифугировать перед вводом в хроматограф). Как вариант, для дериватизации в качестве растворителя можно использовать ацетонитрил.

alexsto пишет:
зачем нужно запаивать ампулы для гидролиза с 6н НСl, нельзя провести его в пробирке на песчаной бане, например?
В ампулах делают, потому что перед запаиванием ампулы вакуумируют для удаления кислорода. Эта процедура нужна только для улучшения правильности результатов некоторых легко окисляющихся аминокислот (метионина, цистеина). Вы ампулы вакуумируете перед запаиванием? Если нет, то с таким же успехом можно проводить гидролиз в герметичном флаконе/пробирке. Только не на песчаной бане, а в нормальном термостате, поддерживающем нужную температуру (110 градусов).

alexsto пишет:
работаю с природными объектами и часто сталкиваюсь с изомерами АК в хроматограмме (определяются как АК по спектру масс), которые выходят в совсем других местах, чем стандарты, отсюда возникают сложности с мат. обсчетом. Как считать такие кислоты?
С какими же изомерами вы сталкиваетесь? Может быть не с изомерами, а просто с другими аминокислотами? Как считать? Не имея стандартных образцов этих аминокислот - никак.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Экстрактор лабораторный ЭЛ-1 Экстрактор лабораторный ЭЛ-1
Предназначен для экстракционного концентрирования нефтепродуктов, ПАУ, фенолов, хлорорганических соединений, тяжелых металлов и других загрязняющих веществ из проб воды любыми органическими растворителями в делительных воронках.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
virtu
VIP Member
Ранг: 2105


10.01.2019 // 22:05:20     

alexsto пишет:
Силилянт - BSTFA(TMCS 1%), также использовали просто BSTFA - тоже хорошо силилирует. Литобзор провела обширный - это стандартные реагенты.
Для АК лучше использовать MTBSTFA (1% t-BDMCS) - дериваты получаются ощутимо более стабильными и артефактов дериватизации меньше.

Коллеги всё правильно пишут - сухой остаток должен быть действительно сухим (азеотропная отгонка остатков воды на последних стадиях крайне желательна) и быть растворённым или, по крайней мере, диспергированным в подходящем и сухом полярном растворителе. Кроме этого, на успешность силилирования влияет чистота самого белка (органические и неорганические примеси).

  Ответов в этой теме: 6

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты