| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ: непрерывный рост поглощения после смены растворителей >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ: непрерывный рост поглощения после смены растворителей | |||||
|
Septiss Пользователь Ранг: 4 |
 27.02.2021 // 20:44:06
Здравствуйте, уважаемые, химики-хроматографисты! Очень нуждаюсь в квалифицированной помощи... Проблема состоит в том, что произошли какие-то странности с поглощением после смены растворителей В качестве растворителей использую А: вода+0,1%ТФУК и Б:MeCN+0,1%ТФУК До замены растворителя хроматограмма имела следующий профиль:  После смены растворителей стал таким:  Речь идет про длину волны 214 нм. градиент от 0 Б до 100 Б за 46 минут |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
voodensky Пользователь Ранг: 550 |
28.02.2021 // 1:17:04
Смена растворителя - это замена на более свежий? Та хроматограмма, которая представлена - это первая хроматограмма после смены растворителя? |
|||||
|
Septiss Пользователь Ранг: 4 |
28.02.2021 // 8:38:50
Да, замена на более свежий Та хроматограмма (она вторая по порядку), точнее сказать кусок хроматограммы - не первая, честно признаться уже несколько раз заменяли растворители потому, что стали происходить такие вещи как: тангенциальный рост поглощения с ростом растворителя Б, или до этого тоже самое, но в отрицательную область поглощения. Хотя система вода+0,1%ТФУК и ацетонитрил +0,1%ТФУК уже опробированная ранее неоднократно для анализа пептидов, но теперь начались какие-то фокусы |
|||||
|
voodensky Пользователь Ранг: 550 |
28.02.2021 // 9:17:40
То, что у Вас изменяется поглощение - это нормально. При смешивании ацетонитрила с водой изменяется объем, соответственно изменяется концентрация ТФУК. Раствор ТФУК одинаковой концентрации у меня ни разу в жизни приготовить не получилось. Она парит, испаряется из ПФ и т. д. Поэтому при смене раствора всегда происходит рост или снижение поглощения. Вы ответили давольно размывчато. Вы сменили ПФ, провели 3-4 хроматограмму и предоставили фрагмент 4? Или сменили растворитель, запустили хроматограмму, посмотрели что поглощение растёт. Остановили не дожидаясь конца хроматограммы, сменили растворитель, запустили хроматограмму, поглощение теперь падает, остановили и т.д...? |
|||||
|
Septiss Пользователь Ранг: 4 |
28.02.2021 // 10:24:35
Попытаюсь как можно подробнее изложить суть проблемы. Долгое время мы использовали ацетонитрил довольно старый (из бутылки, которая уже достаточно давно стоит в нашей лаборатории). Таже к обоим растворителям (вода и ацетонитрил) добавляли ТФУК до концентрации 0,1% Уровень бэйслайн был частенько выше 0 (хоть и не значительно) но шел прямо (собственно первая картинка с профилем хоть и не идеальна, но более менее идет параллельно оси времени. Проблемы начались, когда мы купили новый ацетонитрил (HPLC grade). Сначала мы начали снимать хроматограммы: бэйслайн стал уходить углом в отрицательное поглощение (где в области градиента - 50% ацетонитрила) Подкислили воду - вроде выровняли бэйслайн Затем в банке закончилась вода, поменяли, довели в ней концентрацию ТФУК как обычно до 0,1% - на начале бэйслайн стала уходить вверх, после 50% ацетонитрилла (на градиенте) снова начинает ползти в низ. Решили, что конц. ТФУК в аценотрилле упала, поэтому заменили оба растворителя, результат представлен на рис. 2 (незаконченная хроматограмма) Если концентрация в обоих растворителях +/- одинаковая, то и в любой смеси двух растворителей она должна быть одной и той же: (xV1+xV2)/(V1+V2)=x(V1+V2)/(V1+v2)=x |
|||||
|
voodensky Пользователь Ранг: 550 |
28.02.2021 // 10:45:01
Вы судите о форме на какой хроматограмме после смены растворителя? По первой или 3-4? По поводу концентрации. Пусть смешиваем ацетонитрил и воду. При смешения их объем уменьшается. Соответственно, концентрация ТФУК увеличивается. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Septiss Пользователь Ранг: 4 |
28.02.2021 // 11:59:18
Редактировано 1 раз(а) На второй картинке одна хроматограмма, которую одновременно снимали при 4 разных длинах волн По поводу концентрации, вы правы - прошу прощения |
|||||
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1382 |
01.03.2021 // 20:48:23
Редактировано 1 раз(а) Прогоните для начала градиент: 100% вода --> 100% ACN без добавления ТФУК и поймете в чем у вас проблема. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
