Форумы ANCHEM.RU: Разделение аминокислот без дериватизации ВЭЖХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Разделение аминокислот без дериватизации ВЭЖХ >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Разделение аминокислот без дериватизации ВЭЖХ

SauerTroger
Пользователь
Ранг: 3

21.04.2023 // 5:28:06

Редактировано 1 раз(а)

Всем здравствуйте! Только начал заниматься хроматографией, поручили разделить 20 аминокислот с помощью Waters UPLC H-class. Колонка ОФ Acquity UPLC BEH C18 column (2.1 × 50 mm, 1,7 μm).
Не понимаю пока как уравновесить колонку. Узнал, что они поставляются в 100% ацетонитриле. Попробовал посчитать объем колонки и прогнать 10 объемов р-ра ацетонитрил : вода 80:20 (скорость потока 0.2 мл/мин, 9 мин).
Далее градиентное элюирование А - вода, B - ацетонитрил:
Начало - 2% В
1,5 минуты - до 50% В
5 минут - 2% В.
Ничего не разделяется кроме ароматических аминокислот.
Остальные выходят на 1 минуте (значит ничего не задерживается?)
Предполагаю, что из-за наличия разной pI для аминокислот, то нужен буфер, чтобы перевести их из ионизированного в нейтральное состояние, чтобы они задерживались на колонке..
Подскажите пожалуйста, может я что-то неправильно сделал…

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

21.04.2023 // 7:05:38

Не занимайтесь ерундой. У Waters есть готовое решение с дериватизацией: см. AccQ-Tag и AccQ-Tag Ultra.

SauerTroger
Пользователь
Ранг: 3

21.04.2023 // 7:08:14

vmu пишет:
Не занимайтесь ерундой. У Waters есть готовое решение с дериватизацией: см. AccQ-Tag и AccQ-Tag Ultra.

К сожалению нет возможности эти kit’ы приобрести.
Получается без них никак не получится?

Dexter
Пользователь
Ранг: 29

21.04.2023 // 8:26:02

Если это дипломная работа то проще купить киты).
По сути если удасться подобрать условия (буфер) и правильный градиент, то продадите разработку в waters

SauerTroger
Пользователь
Ранг: 3

21.04.2023 // 8:41:56

Dexter пишет:
Если это дипломная работа то проще купить киты).
По сути если удасться подобрать условия (буфер) и правильный градиент, то продадите разработку в waters

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

21.04.2023 // 8:49:11

Редактировано 1 раз(а)

Если вам надо 5-10-20 аминокислот, а не 2-3 ароматических, то без дериватизации никак. Есть несколько вариантов предколоночной дериватизации. Реагенты можно купить и не в виде готовых наборов. Тот же реагент из AccQ-Таg можно купить не у Waters. Но там еще и элюент Waters продают в виде концентрата неизвестного точно состава, поэтому, не покупая его, придется и с условиями разделения попрыгать. Еще ходовой вариант дериватизации перед ОФ ВЭЖХ - дерив. с ОФА. Есть вариант катионообменного разделения с постколоночной дериватизацией (с нингидрином или ОФА), необходимой в данном случае чисто для нормального детектирования. Но тут нужен (нагреваемый для нингидрина) послеколоночный реактор. Вообще, даже с готовыми методиками, приборами и реагентами это не самая простая задачка для новичка в хроматографии. Там везде есть свои сложности как с дериватизацией, так и с разделением. Это не говоря о пробоподготовке неназванных объектов, которые вы хотите анализировать.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательный центр ФГУ «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море»
Федеральное государственное учреждение «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море» создано в соответствии с распоряжением Правительства Российской Федерации и осуществляет свою деятельность на территории Российской Федерации, во внутренних морских водах, территориальном море, в исключительной экономической зоне и на континентальном шельфе Российской Федерации.

ATem
Пользователь
Ранг: 655

21.04.2023 // 9:48:58

В обращенной фазе без танцев с бубном (да и с ними тоже не всегда) с АК будет проблема. Варианты - катионный обмен, гидрофилка. Либо дериватизация. Можно попробовать FMOC-Cl, DNS-Cl для начала. Но все разделить вряд ли получится, удерживание будет обуславливаться в основном гидрофобным радикалом дериватизирующего агента.

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

24.04.2023 // 1:27:35

без дериватизации можно делить аминокислоты на мультимодальных колонках. Можно купить через Миллаб колонки Влада Орловского. Погуглиnе HELIX Chromatography


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты