Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ стероидов: какие колонки выбрать?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ стероидов: какие колонки выбрать? >>>

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

DSP
Пользователь
Ранг: 352

27.12.2006 // 18:27:46

Farma пишет:
Боюсь что предколонка будет ухудшать разделение , так как ее объем сравним с объемом колонки. Правда в градиентном режиме она будет выступать как концентрирующая колонка и повысит чувствительность.

Уважаемый DSP,
простите, не понял последнюю фразу. Вы предлагаете колоть сыворотку крови без подготовки пробы и концентрировать её на предколонке? Если мне не изменяет память, то Synergi - это обычный 100 ангстремовый силикагель. Мне кажется, на предколонке просто образуется "пробка" за несколько вколов.

Уважаемый Farma. Да упаси боже!
Особенно после разборок с индусами по поводу их колонки, кто и когда ее засушил и почему пики двоят!
А последняя фраза имеет вот какой смысл.
По опыту работы на Милихроме , если мы загоняем 5 мкл пробы , то все OK, а если 50 мкл - то полный отстой, так как пик размывается (маленький объем колонки), особенно в изократике.
Так и здесь- колоночка маленькая. Так нам придется ставить петлю максимум на 20 мкл (1 % от пробы), а так поставим петлю на 500 и отэкстрагированную пробу будем загонять "одним ударом". Разделение конечно ухудшиться ( но это не критично- у нас же МС), но зато чувствительность вырастет.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

DSP
Пользователь
Ранг: 352

27.12.2006 // 18:32:59

Farma пишет:
В принципе, логично. Только, я думаю, на диодной матрице всё равно будет небольшой риск появления на хроматограмме какого-нибудь схожего по структуре вещества из крови

Так косоглазым для клинических исследований это похрену! Сказали померить соотношение между эстрадиолом и эстриолом до и после приема таблеток, вот мы и мерим. В общем сказал доктор в морг- значит в морг.

Farma
Пользователь
Ранг: 382

27.12.2006 // 18:35:12

DSP пишет:

Farma пишет:
Боюсь что предколонка будет ухудшать разделение , так как ее объем сравним с объемом колонки. Правда в градиентном режиме она будет выступать как концентрирующая колонка и повысит чувствительность.

Уважаемый DSP,
простите, не понял последнюю фразу. Вы предлагаете колоть сыворотку крови без подготовки пробы и концентрировать её на предколонке? Если мне не изменяет память, то Synergi - это обычный 100 ангстремовый силикагель. Мне кажется, на предколонке просто образуется "пробка" за несколько вколов.
Уважаемый Farma. Да упаси боже!
Особенно после разборок с индусами по поводу их колонки, кто и когда ее засушил и почему пики двоят!
А последняя фраза имеет вот какой смысл.
По опыту работы на Милихроме , если мы загоняем 5 мкл пробы , то все OK, а если 50 мкл - то полный отстой, так как пик размывается (маленький объем колонки), особенно в изократике.
Так и здесь- колоночка маленькая. Так нам придется ставить петлю максимум на 20 мкл (1 % от пробы), а так поставим петлю на 500 и отэкстрагированную пробу будем загонять "одним ударом". Разделение конечно ухудшиться ( но это не критично- у нас же МС), но зато чувствительность вырастет.

Понятно

Просто у Феноменекса предколонки - в виде таблетки мелкой, кажется. Фиг на ней что сконцентрируешью.

А что разборки с индусами?

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

28.12.2006 // 0:08:02

Насколько я понял, Вас интересует, прежде всего, ВЭЖХ-МС/МС. Пэтому предлагаю продолжать эту дискуссию в одной теме - слишком много специфики.
www.anchem.ru/forum/read.asp?id=3737&recordnum=1

zinj
Пользователь
Ранг: 19

28.12.2006 // 9:39:40

Редактировано 1 раз(а)

Farma пишет:
Опишите подробнее, какие конкретно вещества Вы хотите определять или скиньте эту информацию на моё мыло: farmerino(sobaka)rambler.ru. Могу описать схему установки и разделительную систему. Но я работал лишь с несколькими препаратами стероидного типа.

Спасибо за помощь! Меня интересует количественное определение содержания аналитов (гормонов) в сыворотке крови человека методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии (LC-MS/MS).

Список интересующих аналитов:
1. Стероидные гормоны
a. Кортизол (4-pregnen-6β, 11β, 21-triol-3, 20-dione)
Молекулярная масса: 362.46
steraloids.com/pages/page195.html#Q3880-000

b. Прогестерон (4-pregnen-3, 20-dione)
Молекулярная масса: 314.46
steraloids.com/pages/page185.html#Q2600-000

c. Тестостерон (4-androsten-17β-ol-3-one)
Молекулярная масса: 288.42
steraloids.com/pages/page040.html#A6950-000

d. Дегидроэпиандростерон-сульфат (5-androsten-3β-ol-17-one sulphate, sodium salt)
Молекулярная масса: 390.47
steraloids.com/pages/page051.html#A8530-000

2. Тиреодные гормоны
a. Трийодтиронин (3,5,3'-трийодтиронин)
Молекулярная масса: 651

b. Тироксин (3,5,3',5'-тетрайодтиронин)
Молекулярная масса: 777

Farma пишет:
Что касается колонки, то Вы выбрали какую-то экзотику (и фаза и геометрия). Если я не ошибаюсь, это С20 с хитрым эндкеппингом. Зачем? Мы использовали обычные С8 и С18 фазы (Purospher).

Данную колонку порекомендовал представитель компании Shimadzu. И, если я правильно понял, она все же С18.
В литературе по ВЭЖХ-МС тиреоидных гомонов описываются такие колонки: Zorbax
Eclipse XDB-C18 column was used with a mobile phase consisting of 1 mL/L acetic acid in acetonitrile–water(32:68 by volume) for positive ions and a Zorbax Extend-C18 column with a mobile phase consisting of 2 mL/L ammonium hydroxide in methanol–water (32:68 by volume) for negative ions.
Можно ли подобрать универсальную колонку для тиреоидных и стероидных гомонов? Или необходимы два разных типа колонок?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

AAC Спектрометр Analytik Jena contrAA®
Атомно-абсорбционные спектрометры высокого разрешения с одним непрерывным источником спектра – ксеноновой лампой – и двойным монохроматором для проведения мультиэлементного анализа без смены ламп.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

DSP
Пользователь
Ранг: 352

28.12.2006 // 10:30:09

Подобрать можно, причем не столько колонку , сколько подвижную фазу. Если для Вас не критично время разделения ( не нужно выдать результат анализа врачам через 15 минут) , то все эти гормоны могут быть надежно разделены если использовать плавный градиент содержания ацетонитрила в подвижной фазе, например от 10 до 90 , при произвольных значениях рН от 4 до 7.
Другой вопрос, что пробоподготовка для анализа тиреоидных и стероидных гормонов будет резко отличаться, если Вы конечно не планируете такое зверство как прямой ввод биологической жидкости в колонку после преципитации белков трихлоруксусной кислотой. Но это "зверство", и колонки вы будете менять ежемесячно.
А теперь философия :
Если у Вас стоит чисто клиническая задача определения указанных гормонов в биологической жидкости , описаная "для китайцев" то можно обойтись на первых порах и без тандемного масс-спектрометра, хотя это сама по себе вещь очень хорошая , особенно при определении неизвестных интоксикантов и вообше сильно облегчит жизнь.
Дело в том, что тандемный МС-МС составит 80 % стоимости системы.
Не ясно, насколько чувствительности УФ и МС детекторов будет достаточно для анализа тиреоидных гормонов (так как их количество в крови весьма низко). Наверное хватит.
Кстати Вы посмотрели по литературе используются ли для их анализа флюориметрические детекторы , так как их чувствительность превышает чувствительность для УФ детекторов на два порядка, а LC-МС-МС на 2-3 порядка.

zinj
Пользователь
Ранг: 19

28.12.2006 // 11:16:35

DSP пишет:
А вообще , вопрос ради интереса, Вы с этой задачей /гормоны/ уже работали, или это так, пока первые прикидки "во что обойдется вся система".
А может вообще Вам для дипломной, хотя с учетом первого вопроса (цена Shimadsu LC-MS-MS) мне в это не очень вериться.

С данной задачей сталкиваюсь впервые. Пока предварительные прикидки, например, LCMS-2010 EV в Питере предлагают купить за 147.709,34 ЕВРО.
Цель - получить референсную методику на основе хромато-масс-спектрометрии для твердофазного иммуно-ферментного анализа

zinj
Пользователь
Ранг: 19

28.12.2006 // 11:25:50

Islander пишет:
Насколько я понял, Вас интересует, прежде всего, ВЭЖХ-МС/МС. Пэтому предлагаю продолжать эту дискуссию в одной теме - слишком много специфики.
www.anchem.ru/forum/read.asp?id=3737&recordnum=1

Спасибо за ответ. Абсолютно с Вами согласен, что проще будет вести дисскусию в одной теме www.anchem.ru/forum/read.asp?id=3737&recordnum=0

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

28.12.2006 // 11:30:45

Мой вам единственный совет.
Прислушайтесь к тому, что говорит Islander. Особенно, если остановились на варианте ВЭЖХ-МС-МС. Он на этом деле не одну собаку съел.
Ну а вообще, как правильно уже сказали, для этих задач можно и на обычном хроматографе с УФ детектором работать, хоть с обычными, хоть с RAM-сорбентами.

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

28.12.2006 // 18:37:30

Редактировано 1 раз(а)

Леонид пишет:
Мой вам единственный совет.
Прислушайтесь к тому, что говорит Islander. Особенно, если остановились на варианте ВЭЖХ-МС-МС. Он на этом деле не одну собаку съел.
Ну а вообще, как правильно уже сказали, для этих задач можно и на обычном хроматографе с УФ детектором работать, хоть с обычными, хоть с RAM-сорбентами.

Спасибо за лестную характеристику (как бы несварение не получить)! А вот УФ детектора для заявленных в том топике пределов обнаружения может хватить только для Дегидроэпиандростерон-сульфата, и то, после дериватизации. Так что прошу считать эту тему закрытой и продолжать дискуссию в рамках ВЭЖХ-МС/МС (ссылки выше).


Ответов в этой теме: 22 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты