Форумы ANCHEM.RU: Идентификация церамида

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Идентификация церамида >>>

Ответов в этой теме: 8

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Идентификация церамида

vesalii
Пользователь
Ранг: 3

25.01.2007 // 21:53:16

Здравствуйте.
Обращаюсь за помощью, может, кто сталкивался с моей проблемой.
Получаем при ТСХ пятна. Знаем, где должен быть церамид. Но йодом он не определяется. (концентрация, наверное, мала) Есть методики с фосфорно-молибденовой кислотой и молибденовокислым аммонием. Но я как-то не догоняю - эти вещества для идентификации фосфолипидов. А в церамидах и изначально в церамиде фосфора нет и в помине. Зато там есть амидная связь - но биуретовая реакция на пластине - это очень незначительное изменение окраски - пик не ловится.

Может, кто знает, при помощи чего поймать церамид? Или что сделать, чтобы найти его вышеописанными способами?

спасибо заранее.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Chatkin
Пользователь
Ранг: 46

25.01.2007 // 22:59:19

Здравствуйте.
Попробуйте спросить в соседнем форуме у биологов, они чаще имеют дело с нервной тканью.
Удачи

Chatkin
Пользователь
Ранг: 46

25.01.2007 // 23:01:59

РS А может Йод просто обесцвечивается из за реакции с двойной связью?

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

26.01.2007 // 0:22:48

Извините если не в тему, но церамиды замечательно определяются тандемной масс-спецтрометрией, даже без разделения от фосфолипидов и триглицеридов. Анализ будет более точным (вернее, улучшится динамический диапазон) если экстрагировать полосу с ТСХ. Если интересно, я могу дать ссылки на оригинальные методические статьи

vesalii
Пользователь
Ранг: 3

26.01.2007 // 2:16:54

Chatkin пишет:
РS А может Йод просто обесцвечивается из за реакции с двойной связью?

Хм, да.... по-идее может. Но он же все равно в избытке берется. Только он в камере в избытке получается. И, даже прореагировав, пятно выявить должен бы... Ну да ладно. Если ничего не получится, пойду у биологов спрашивать. (у самого работа по патофизиологии)

vesalii
Пользователь
Ранг: 3

26.01.2007 // 2:19:11

Spectrometrist пишет:
Извините если не в тему, но церамиды замечательно определяются тандемной масс-спецтрометрией, даже без разделения от фосфолипидов и триглицеридов. Анализ будет более точным (вернее, улучшится динамический диапазон) если экстрагировать полосу с ТСХ. Если интересно, я могу дать ссылки на оригинальные методические статьи

Почему же не в тему? Нужно будет узнать, потянет ли наша лаборатория тандемную масс-спектрометрию (даже слабо представляю, что это). Если не трудно - дайте пожалуйста ссылки на статьи.
Спасибо)

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

СИБЭКОПРИБОР, ПЭП, ООО
Производит и поставляет: Анализаторы нефтепродуктов, жиров и НПАВ в водах, вспомогательное оборудование, термостаты, лабораторные экстракторы и пробоотборные системы. Аттестованные методики выполнения измерений. ГСО нефтепродуктов и жиров в воде.

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

26.01.2007 // 12:50:50

ОК, здесь проверенно работающие методы (вообще литературы по анализу церамидов масса):

Liebisch, G., Drobnik, W., Reil, M., Trumbach, B., Arnecke, R., Olgemoller, B., Roscher, A., and Schmitz, G. (1999). Quantitative measurement of different ceramide species from crude cellular extracts by electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS). J Lipid Res 40, 1539-1546.

Han, X. (2002). Characterization and direct quantitation of ceramide molecular species from lipid extracts of biological samples by electrospray ionization tandem mass spectrometry. Anal Biochem 302, 199-212.

Эта статья постарее, но уж больно душевно написано:

Gu, M., Kerwin, J. L., Watts, J. D., and Aebersold, R. (1997). Ceramide profiling of complex lipid mixtures by electrospray ionization mass spectrometry. Anal Biochem 244, 347-356.

Удачи!

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

26.01.2007 // 13:43:00

Редактировано 1 раз(а)

vesalii пишет:
Здравствуйте.
Обращаюсь за помощью, может, кто сталкивался с моей проблемой.
Получаем при ТСХ пятна. Знаем, где должен быть церамид. Но йодом он не определяется. (концентрация, наверное, мала) Есть методики с фосфорно-молибденовой кислотой и молибденовокислым аммонием. Но я как-то не догоняю - эти вещества для идентификации фосфолипидов. А в церамидах и изначально в церамиде фосфора нет и в помине. Зато там есть амидная связь - но биуретовая реакция на пластине - это очень незначительное изменение окраски - пик не ловится.

Может, кто знает, при помощи чего поймать церамид? Или что сделать, чтобы найти его вышеописанными способами?

спасибо заранее.

Знаю и скажу, потому что сам долбался с подобной проблемой до одури. У меня была схожая проблема. Разрабатывал методологию количественного контроля лизолецитина в легочном сурфактанте. Уже как я не "приседал" возле него. Перепробовал и ацетат меди в 30 % фосфорной кислоте и 5 % раствор фосфорно-молибденовой кислоты и раствор флуоресцеина. В общем кефалины, лицетин, сфингомиелин, инозитфосфатидилхолины, фосфатидилсерин, ФГ и даже холестерин - все отлично получается при проявлении 5 % водной фосфорно-молибденовой кислотой. После хроматографирования окунаешь пластинку в раствор, промакиваешь фильтровалкой и греть при 100-120 С в шкафу до появления темно-синих пятен на лимонно-желтом фоне. Да, подвижную фазу лучше брать нейтральную, - классическую - на мой взгляд информативнее, чем щелочные (с триэтиламином) или кислые (с уксусной к-той).
А вот лизолецитин - ну никак ...

. Я тут даже постил по этому поводу. Ну как будто тот же лицетин, малость укушенный, а ничем не проявляется.Скажу Вам, что есть два гарантированых метода :
1. Реакция Ауэрбаха.
2. Реактив Драгендорфа.

Що це такэ ?
1. Реакция на атомы азота в фосфолипидах. Готовите раствор бромфенолового синего (0,05 г в 10 мл ацетона). И раствор нитрата серебра (1 г в 100 мл воды), затем раствор бромфенолового доводите до 100 мл раствором нитрата серебра.
Проявление : Пластинку окунаете в этот раствор чуть-чуть подержите в нем, промываете прточной водой и учитываете (денситометрируете). Я обалдел, когда обнаружил энтот самый лизолецитин на пластинке, причем четкие фиолетовые пятна на бледно-голубом фоне.

Можно еще попробовать и некую модификацию - раствор бромфенолового синего в 0,1 м растворе гидроксида калия. Пластинку опрыскиваете или окунаете и греете при 100 С.

2. Ну стандартный проявитель , пропись найти не проблема. Тоже отлично проявляет азотсодержащие вещества.

Fironju
Пользователь
Ранг: 3

11.12.2018 // 12:49:48

Spectrometrist пишет:
ОК, здесь проверенно работающие методы (вообще литературы по анализу церамидов масса):

Liebisch, G., Drobnik, W., Reil, M., Trumbach, B., Arnecke, R., Olgemoller, B., Roscher, A., and Schmitz, G. (1999). Quantitative measurement of different ceramide species from crude cellular extracts by electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS). J Lipid Res 40, 1539-1546.

Han, X. (2002). Characterization and direct quantitation of ceramide molecular species from lipid extracts of biological samples by electrospray ionization tandem mass spectrometry. Anal Biochem 302, 199-212.

Эта статья постарее, но уж больно душевно написано:

Gu, M., Kerwin, J. L., Watts, J. D., and Aebersold, R. (1997). Ceramide profiling of complex lipid mixtures by electrospray ionization mass spectrometry. Anal Biochem 244, 347-356.

Удачи!

Добрый день, подскажите пожалуйста, а есть еще какие либо методики по церамидам, если возможно поделитесь ссылками.


Ответов в этой теме: 8	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты